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1目的与意义:槲皮素是一种常见的膳食抗氧化剂,为类多酚黄酮类化合物,其基本理化性质为:溶于冰醋酸,遇见碱性水溶液呈现出黄色,几乎不溶于水。有关槲皮素的药理作用,最近几年受到广泛关注,比如:抗菌、抗炎、抗癌、抗病毒、免疫调节和保护心血管等方面的作用。而在抗肿瘤这一块,有研究发现:槲皮素可以增加细胞色素C还原酶、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)、谷胱甘肽还原酶和DF-硫辛酰胺脱氢酶的活性从而达到抗癌的药理作用。针对于癌症种类,也有前列腺癌细胞、乳腺癌细胞、卵巢癌细胞等等方面,然而针对于胃癌方面的报道,或更深层次的作用机制,现研究报道中并不明确。本研究先以槲皮素对胃癌细胞的增殖抑制情况着手,然后深以探究抑制增殖背后的相关作用机制。2方法:2.1槲皮素对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制情况以SGC-7901为研究对象,结合MTT和结晶紫两种实验方法,采用12h、18h、24h三个作用时间段给予细胞药物刺激,将MTT得到的数据绘制成表;结晶紫实验方面,除了三组结晶紫图片外,分别将每孔中的结晶紫以乙酸溶解,测定每孔OD值并绘制成图。对比研究槲皮素对SGC-7901的增殖抑制情况。2.2槲皮素对于胃癌SGC-7901细胞周期的影响以前续MTT和结晶紫实验结果为先决条件,筛选出最适宜的药物作用时间,收集细胞后,以流式细胞技术为方法,观察槲皮素对胃癌SGC-7901细胞周期分布的影响情况。2.3槲皮素对于胃癌SGC-7901细胞相关蛋白表达的影响以流式细胞术判断出槲皮素对于SGC-7901作用后的阻滞周期,再采用Western Blotting实验方法,检测槲皮素对胃癌SGC-7901细胞中,其ATM和p-ATM、H2AX和r H2AX、Cdc25C和p-Cdc25C、Chk2和p-Chk2、Cdk2和p-Cdk2、Cyclin A等细胞周期相关蛋白的蛋白表达影响。3结果:3.1槲皮素对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制情况MTT实验中,三组药物作用时间对比可看出,随着槲皮素浓度的增加,其增殖抑制情况皆呈现出剂量依赖性关系,同一浓度下,随着作用时间的递增,槲皮素药物对于SGC-7901的增殖抑制作用,也随之变高。在结晶紫实验中,随着药物浓度的递增,结晶紫的吸光度值随之减少,每一孔内的结晶紫也随之减少。无论是从结晶紫图上的结晶紫残留量,还是测得对应孔里残留结晶紫的吸光度值,都能得出槲皮素对于SGC-7901有着不错的抑制效果,然而在人体胚胎细胞对照试验中,发现以100μM为药物浓度时,24h药物作用时间组出现大量细胞死亡的现象,因而在药物作用时间上,18h作用时间更加适宜。3.2槲皮素对于胃癌SGC-7901细胞周期的影响流式细胞仪结果显示,随着槲皮素剂量的增加,SGC-7901的细胞周期S期呈不断攀升的趋势,彼此间为剂量依赖性关系;当药物浓度为120μmol/ml时,S期所占比例更是达到了56.91%,超出了百分比的一半,且具有显著性差异。3.3槲皮素对于胃癌SGC-7901细胞相关蛋白表达的影响在Western Blotting实验里,在随着药物浓度增加,相关蛋白表达量上,其p-ATM、r H2AX、p-Chk2、p-Cdk2蛋白表达量皆随着药物浓度的递增而呈现出上升的趋势,Cdc25A蛋白表达量随之减少,而Cyclin A则基本保持不变。4结论:4.1在增殖抑制实验中,无论是MTT的数据结果,还是结晶紫的图表结果,皆能得出槲皮素对于SGC-7901有着不错的增殖抑制效果,且三组药物作用时间对比,18h药物作用时段为最佳。4.2通过流失细胞技术,很直观的得出:槲皮素阻滞SGC-7901细胞周期于S期。4.3 p-ATM、r H2AX、p-Chk2、p-Cdk2蛋白表达量的上升,Cdc25A蛋白表达量的减少,Cyclin A表达量的基本不变,阐明了槲皮素是通过磷酸化一系列的细胞周期相关蛋白而发挥抑制效率的,而DNA损伤信号通路,很有可能是“ATM-Chk2-Cdc25C-CDK2/Cyclin A”通路