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L-丝氨酸可用于肝损伤修复和抗癌药物的开发,具有广阔市场前景。由于酶促法合成反应简单、转化率高,已成为丝氨酸主要生产方式。丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)是该过程的关键酶,如何大量低成本获得SHMT是生产丝氨酸的关键。本文对基因工程菌SRZ018发酵生产SHMT进行了研究,通过全面优化培养基及培养条件,以期提高发酵生物量以及SHMT单位质量酶活,从而提高SHMT产量,降低生产成本。通过优化研究,取得了主要结果如下: (1)研究了基因工程菌的生长、SHMT表达及底物消耗的发酵动力学规律,发现SHMT表达与菌体生长完全相关,即促进SRZ018生长有利于提高SHMT的总酶活。 (2)摇瓶发酵研究发现基因工程菌SRZ018生长及SHMT总酶活对温度和pH有较宽的适应范围,但对溶解氧的变化较为敏感,并确定了其适宜的生长温度和pH范围分别为37℃-42℃,pH6.0-9.0。 (3)研究培养基中不同营养物质对SRZ018生长及SHMT总酶活的影响,发现单糖和二糖作为碳源会降低单位质量细胞SHMT的比活;还发现玉米浆、甘油、谷氨酸钠、蛋白胨、硫酸铵、硝酸钠、磷酸氢二钾、维生素 B6、脯氨酸可促进 SRZ018的生长,其中谷氨酸钠、玉米浆、蛋白胨、硝酸钠、维生素B6和脯氨酸还能够促进SHMT比活的增加。 (4)使用Plackett-Burman和Box-Behnken设计优化了玉米浆、甘油和磷酸氢二钾等为主要组分的培养基,确定了富含玉米浆的最优培养基组成成分为:玉米浆51.96g/L,磷酸氢二钾5.88g/L,甘油13.60g/L,谷氨酸钠5g/L,MgSO40.8g/L,蛋白胨5g/L,脯氨酸0.5g/L,维生素B60.5g/L。在优化的培养基条件下,SRZ018生物量可达2.88g/L(DCW), SHMT总酶活达0.446U/ml,较优化之前分别提高了82%和98%。