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冷冻干燥猪精子能在4℃下长期保存,该方法已在小鼠和兔上成功运用获得后代,但大型哺乳动物尚未取得成功。该方法逐步成为精子长期保存方法中新的研究热点。本研究中,对猪精子冻干处理后,通过顶体染色观察其外部形态,借助扫描电镜和透射电镜观察其超微结构,利用单细胞凝胶电泳检测冻干猪精子DNA完整性,并对冻干猪精子进行显微注射,激活后体外培养观察。分别比较了不同保护剂(海藻糖和EDTA)和保存温度(4℃和-20℃)等因素对猪精子冷冻干燥保存效果的影响。为进一步提高猪精子乃至其他哺乳动物精子冷冻干燥保存研究提供一些理论和实践基础。研究结果如下：猪精子在冷冻干燥过程中,海藻糖的保护效果明显优于EDTA。在4℃和-20℃下,海藻糖处理组中冻干猪精子分别保存2个月、4个月和6个月后其外部形态并未发生显著变化。利用电子显微镜观察冻干猪精子的超微结构,海藻糖处理组和EDTA处理组均与对照组之间差异显著,前者冻干猪精子染色质保存较完整,少许冻干精子出现顶体和尾部损伤,后者出现顶体脱落,断尾现象。对比新鲜、冷冻干燥和冷冻保存的猪精子DNA发现,新鲜猪精子和冻干猪精子的DNA完整率之间差异不显著(P>0.05),而冷冻保存的猪精子与二者之间差异显著(P<0.05)。冻干猪精子单精子注射后,1h内采取联合激活的方式(1.0 kV/cm,30μs,1DC+10μg/mLCHX)对受精卵激活培养后,囊胚形成率较高。海藻糖处理组中雄原核形成率(68.52%),卵裂率(59.17%)和囊胚率(19.16%)均显著高于EDTA处理组,而与对照组之间差异极显著(P<0.01)。在4℃下分别保存2个月、4个月和6个月后,通过单精子注射,雄原核形成率、卵裂率,和囊胚率均无显著差异(P>0.05)；而冻干猪精子水化孵育后使用,孵育1h内与2h之间差异极显著(P<0.01)。因此,以海藻糖为保护剂的冻干猪精子在4℃下保存半年及水化后孵育时间在1h内,对其外部形态、DNA完整性影响较小,借助辅助生殖技术将冻干精子注射入卵后,受精卵采取联合激活的方式(1.0 kV/cm,30μs,1DC+10μg/mL CHX)进行激活培养,获得较高的囊胚率。