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由病毒感染导致猪腹泻的生猪肉可通过市场流通传染给人的潜在危害逐渐引起人们的高度关注,尤其是近些年来新发现的,且研究还不够完善的病毒。如今猪嵴病毒(porcine kobuvirus, PKV)、猪环曲病毒(porcine torovirus, PToV)、猪星状病毒(porcine Astroviride, PAstV)在腹泻猪体内检出率高,并且与它们同属的其他病毒也有报道在腹泻或肠道病人体内发现,故也增加了PKV、PToV、 PAstV对感染人这一潜在风险的研究价值。但是这三种病毒的流行病学和临床症状极为相似,在临床和病理学上很难区分。为了进一步研究这三种可能致猪腹泻的病毒,本研究建立了能同时检测这三种病毒的多重RT-PCR检测方法,并对四川某屠宰场的猪肉和猪的肠道内容物进行采样和初步检测试验。其主要结果如下：1.PKV、PAstV和PToV的多重RT-PCR检测方法的建立根据GenBank登录的PKV 3D基因、PAstV ORF2基因、PToVM基因,利用软件Primer 5.0分别设计了三对特异性引物。预计扩增大小分别为358bp、938bp和718bp的片段。先分别建立了针对各病毒的单项RT-PCR检测方法,在此基础上,经过反应条件和反应程序的优化,建立了一种能够同时检测PKV、PAstV和PToV的多重RT-PCR的方法,能从PKV、PAstV和PToV的阳性模板中同时扩增出与目的片段大小相符的3条特异性条带；并将多重RT-PCR和单项RT-PCR方法进行了比较。敏感性试验中,T-PCR检测方法能够检测到PKV、PAstV和PToV的最低浓度分别约为1.51×104拷贝/μL、1.19×103拷贝/μL、1.26×104拷贝/μL；对同一模板进行了五次检测,与单项RT-PCR结果一致。结果表明,本方法具有很好的特异性、敏感性和重复性；同时具有快速、准确的特点,可用于PKV、PAstV和PToV的检测。2.多重RT-PCR检测方法的初步应用用多重RT-PCR检测方法对屠宰场随机采取20头猪的猪肉进行PKV、PAstV、PToV检测,结果显示20份猪肉均未检出；对四川部分地区猪场的96份屠宰生猪的肠内容物进行采样,运用建立的多重RT-PCR方法对其进行检测,结果统计分析发现PKV、PAstV、PToV的阳性检出率分别为47%、15%,11%,不同交叉混合感染的有23份,其中12份检出PKV和PAstV混合感染,5份PKV和PToV混合感染,4份PAstV和PToV混合感染,2份样品同时检测出三种病毒感染。该方法的建立为监测或检测临床生猪病例、屠宰生猪染毒以及猪肉污染带毒等方面提供了方法参考,为保障生猪健康养殖和猪肉质量安全提供了理论依据。