背景 在恶性肿瘤的治疗中，热疗作为一种有效的辅助治疗手段，已为大多数学者所接受。热疗与放化疗结合，可以很大的提高肿瘤的治疗效果。骨肉瘤的治疗发展到今天，保肢、尽最大可能保存肢体功能业已成为骨骼肌肉系统肿瘤治疗方法的主流。作为肿瘤的辅助治疗手段之一，既往的热疗方案是对大块组织的同时加热，当肿瘤包裹重要的血管神经，肿瘤又对放化疗又不敏感时，保肢手术就变得不可能。同时，由于骨肉瘤发病部位的组织结构特点，现有的传统热疗方法，微波、射频、超声等会由于其传导介质密度的改变在骨面形成反射，造成局部过热。而在骨肉瘤的好发部位（如膝关节），重要的血管神经是紧贴骨面走行的，就容易造成血管神经束的热损伤。 大量的临床研究和试验研究的结论表明，热疗结合放疗和／或化疗对肿瘤细胞的杀伤作用要明显增强。但是传统的热疗方法有许多缺陷。如温度分布不均匀，脂肪过热等等。Gordon等于1979年提出了细胞内热疗的概念，期望能够通过外加磁场诱导磁性颗粒产热，达到对肿瘤均匀一致加热的目的。但目前还没有对骨肉瘤方面的试验数据。本试验是交变磁场诱导直径10nm的磁性纳米材料Fe₃O₄对骨肉瘤细胞系的杀伤作用的体外及动物试验，初步探讨适合于骨肉瘤细胞系SOSP-9607的磁场强度、纳米粉的浓度及细胞内热疗的可能性，为其进一步的临床治疗研究奠定基础。 目的 通过对交变磁场诱导高温对骨肉瘤细胞系SOSP-9607杀伤作用的研 第四军医大学硕士学位论文究，探讨其对临床应用的可能性及潜在价值。 方法 1．将骨肉瘤细胞系SOSP－9607在含有0．3％的FesO。纳米材料的1640培养基中培养，在 0．sh、Zh、4h、sh、24h、48h、72h、96h、120h光镜、电镜及铁染色观察细胞对纳米粉的吞噬情况。 2．观察在不同的驱动电压的交变磁场诱导下含有不同浓度的磁性纳米材料的 RPMI－1640培养基的升温曲线并测量其磁通量密度。 3．将装有 109／Inl个细胞的冻存管置入有水冷降温的交变线圈中。交变磁场频率 50kHz，磁场强度为 78．88 mT，标本分为 3组：①细胞内热疗组；②磁流体热疗组（培养基的 Fe。O。纳米粉的浓度 0．3％＊；③对照组：MTT及苔盼篮排斥试验检测细胞活性。 4．建立 SD大鼠的 UMR－106肿瘤模型 20只，将其随机分为两组，实验组与对照组，在 2周后肿瘤生长至约 1．5 XI．scm大小，将 Fe3O。纳米粉均匀注射于肿瘤局部，0．5小时后，在50kHz、78石smT的交变磁场下诱导热疗30min，热疗一周后，测量肿瘤体积，处死动物，皮下剥离肿瘤，称重，常规固定，脱水，包埋，切片，HE染色及普鲁士兰十依红染色。观察肿瘤的坏死情况。 结果 1、骨肉瘤细胞对铁磁性FqO4纳米粉有明显的吞噬作用，24 ’J’时内，吞噬量随时间的延长而增多，24小时后，变化不明显。铁染色后光镜及电镜观察显示细胞内有明显的铁磁性纳米颗粒被细胞吞噬，大部分位于细胞的溶酶体内，有包膜，而有一部分位于细胞质内，周围未见溶酶体膜，细胞核内未见纳米颗粒。 2、在交变磁场作用下，磁流体的浓度越高，交变磁场强度越大，产热作用越强，升温越快，最终的平衡温度也越高。磁性纳米材料resO4密 ．3－ 第四军医大学硕士学位论文度为 0．3％1640培养基在驱动电压为 120V的交变磁场下的最终平衡温度为 44．5 oC。 不同驱动电压下的磁场强度测量结果： 驱动电压（V）40 80 100 120 160 磁通量密度（mT）27．52 35．28 57．64 78．SS 102．08 3、细胞实验的结果： A．MTT法检测的实验结果： l）细胞内热疗组结果： 抑瘤率一（对照组一实验组）／对照组一0．339用．497—68．ZI％ 2)磁流体加热MT了法检测的实验结果： 抑瘤率一（对照组一实验组）／对照组一0．433／0．497＝87．12％ B．苔盼兰排斥实验检测结果： 镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。 l)单纯细胞内热疗组：抑瘤率。死细胞数／细胞总数X 100％二65．32％； 2)磁流体热疗苔组：含 0．3％FesO。培养基组： 抑瘤率一死细胞数／细胞总数X100％一0．53％。 4、动物试验的结果： 本组试验大鼠无感染及自然死亡现象，在外加磁场的作用下，大鼠比较安静，无烦躁、撕咬等。热疗后局部皮肤未见坏死，肿瘤局部毛发无脱落。抑瘤率门一试验组平均瘤重／对照组平均瘤重)X 100％t6．90％。组织切片结果发现实验组有大量的坏死肿瘤细胞。 结论 交变磁场诱导铁磁性纳米颗粒产生高温对骨肉瘤有一定的杀伤抑制作用，值得进一步研究。