片形吸虫病(Fasciolasis)是由肝片吸虫和大片吸虫感染引起的人畜共患寄生虫病,呈世界性分布。由于片形吸虫病发病缓慢,易于传播,至今没有一种有效果的预防措施,严重威胁牧区人民的健康和畜牧业发展。因此,对片形吸虫病的早期诊断和免疫预防也就成为了当前的研究热点。本研究通过生物信息学分析大片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Fg.TPx)的基因序列及其编码的氨基酸序列的特性,设计引物,扩增出Fg.TPx基因,构建原核重组质粒,利用大场杆菌表达载体进行表达和鉴定。结果显示PCR扩增得到目的基因的长度为654bp,该基因与互联网检索的基因序列同源性为98%,氨基酸序列同源性为99%,表达并纯化出Fg.TPx,分子量约48KDa。用纯化的重组蛋白Fg.TPx作为抗原免疫家兔制备抗血清,通过ELISA及、Vestern blot对重组蛋白Fg.TPx的免疫学特性进行初步研究。结果表明重组蛋白具有大片吸虫天然TPx蛋白的免疫活性,保持了天然TPx的生物学功能表位,有望成为大片吸虫病疫苗的候选靶抗原,并为大片吸虫病的免疫诊断提供了有效的早期诊断抗原物质。用重组蛋白作为抗原建立ELISA方法,检测水牛感染片形吸虫的风险。由于感染片形吸虫的人阳性血清尚未收集到,不能利用此方法检测人片形吸虫病,因此我们利用实验室已有的单克隆抗体建立检测循环抗原的夹心ELISA方法。基于两种ELISA方法的联合应用,提供了可被参考的诊断早期感染片形吸虫病的免疫学方法,为人感染片形吸虫病的临床筛查打下基础。