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目的:1.拟证实艾灸干预慢性萎缩性胃炎疗效作用;2.拟明确艾灸可能通过影响PTEN/PI3K/Akt信号通路,调控其相关基因的表达,有效控制CAG的胃黏膜损伤,以达到治疗CAG和防治癌前病变的目的。方法:将雄性Wistar大鼠随机分为正常组,造模组,造模组采用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导剂结合夹尾刺激与饥饱失常法制备CAG大鼠模型。34周模型鉴定成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、隔药饼灸组、西药组。正常组、模型组给予固定捆绑;隔药饼灸组取中脘、气海穴进行隔药灸2壮,每日1次,每周6次,治疗4周;西药组予叶酸悬浊液1.0ml/100g(即叶酸2mg/kg)灌胃;每日1次,每周6次,治疗4周。从大鼠的一般情况、胃窦组织形态学变化,观察隔药饼灸干预CAG的疗效;采用RT-q PCR、免疫组化的技术与方法,检测各组大鼠胃窦组织中PTEN、PI3KCa、caspase-9、P53表达水平及PTEN、p-akt、caspase9、PIP2、MDM2蛋白表达。结果:(1)各组大鼠一般情况比较:与正常组比较,CAG大鼠被毛污黄易脱毛且干涩无光泽,精神萎靡,两眼少神,耳廓爪甲苍白,体型瘦小,反应迟钝,不喜活动,易惊恐,喜扎堆于鼠笼一角,饮食少,粪便偏软、时不成形或粪便干结,鼠笼内气味秽臭;隔药饼组和西药组干预后,皮毛脱落及光泽较模型组改善、精神好转,耳廓由苍白逐渐转为淡红,体重及活动量有所增加,进食稍增加,粪便逐渐成型。(2)各组大鼠体重情况的比较:34周造模结束后,与正常组比较,CAG模型组大鼠体重减轻,差异具有统计学意义(P<0.05)。4周治疗后,与CAG模型组比较,隔药饼灸组、西药组体重增加较为明显,但无统计学意义(P>0.05)。(3)各组大鼠胃窦组织形态学变化的比较:肉眼观察:正常组大鼠:胃黏膜组织呈淡红色,富有弹性,皱襞整齐有规则,厚度适中,黏膜光滑无出血,无水肿,无糜烂,无溃疡等。模型组大鼠胃黏膜颜色苍白,变薄黏膜欠光滑,甚至糜烂溃疡,时有囊肿,皱襞紊乱低平甚至消失,黏膜脆性增加。隔药饼灸组、西药组大鼠与模型组相较,均有不同程度的改善。光学显微镜观察:正常组大鼠黏膜上层的固有腺体结构排列整齐,形状规则,疏密均匀,黏膜层少见中性粒细胞、淋巴细胞等炎症细胞;模型组大鼠固有腺体结构紊乱,腺体减少,变薄,形态不一,腺泡状结构,囊性扩张,可见杯状细胞,发生萎缩,肠上皮化生和(或)异型增生,甚至有2只大鼠达到低分化腺癌,黏膜层及黏膜下层可见大量的中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等。经过4周治疗后,与模型组比较,隔药饼灸组、西药组大鼠固有腺体排列不规整,黏膜层及下层炎性细胞相对减少,固有腺体萎缩、肠上皮化生、异型增生减轻。(4)隔药饼灸对各组大鼠胃窦组织中PTEN、p-akt、caspase9、PIP2、MDM2蛋白表达的影响。PTEN:与正常组比较,CAG大鼠胃窦组织中PTEN蛋白的表达显著下调,差异有统计学意义(PM<0.001);与模型组比较,西药组、隔药饼灸组胃窦组织PTEN蛋白表达增加,均具有统计学意义(P均<0.05);p-akt:与正常组比较,CAG大鼠胃窦组织p-akt蛋白阳性表达显著上升,差异有统计学意义(PM<0.001);与模型组比较,西药组、隔药饼灸组胃窦组织p-akt蛋白阳性表达下调,均具有统计学意义(PWM<0.001,PHM<0.001);西药组和隔药饼灸组p-akt蛋白阳性表达无明显差异,差异无统计学意义(PHM=0.639)。PIP2:与正常组比较,CAG大鼠胃窦组织PIP2蛋白表达显著上调,差异有统计学意义(PM<0.001);与模型组比较,西药组、隔药饼灸组胃窦组织PIP2蛋白表达明显降低,均具有统计学意义(P均<0.05);Caspase-9:与正常组比较,CAG大鼠胃窦组织caspase-9蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(PM<0.001);与模型组比较,西药组、隔药饼灸组胃窦组织caspase-9蛋白表达有所增加,均具有统计学意义(P均<0.05);MDM2:与正常组比较,CAG大鼠的MDM2蛋白表达增加,差异有统计学意义(PM<0.001);与模型组比较,西药组、隔药饼组胃窦组织MDM2蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。(5)隔药饼灸对各组大鼠胃窦组织PTEN、PI3KCa、caspase9、P53m RNA表达的影响。Caspase-9:与正常组比较,CAG大鼠胃窦组织Caspase-9m RNA的表达水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,西药组、隔药饼灸组大鼠胃窦组织Caspase-9m RNA的表达明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05);PTEN:与正常组比较,CAG大鼠胃窦组织的PTENm RNA有下降趋势,但差异无统计学意义(P=0.058);与模型组比较,西药组和隔药饼灸组胃窦组织PTENm RNA表达水平升高,西药组差异有统计学意义,隔药饼灸组差异无统计学意义(PWM=0.001,PHM=0.078);PI3KCa:与正常组比较,CAG大鼠胃窦组织的PI3KCAm RNA的表达有上升趋势,差异无统计学意义(PM=0.568);与模型组比较,西药组、隔药饼灸组胃窦组织PI3KCam RNA表达水平上调,差异有统计学意义(PWM=0.016,PHM=0,004)。P53:与正常组比较,CAG大鼠胃窦组织的P53m RNA表达有升高趋势,但差异无统计学意义(PM=0.384)。与模型组比较,隔药饼灸组胃窦组织P53m RNA表达呈下降趋势,西药组胃窦组织P53m RNA表达水平无下降趋势,差异均无统计学意义(PWM=0.433,PHM=0.769)。结论:1.隔药饼灸“中脘、气海”穴可改善CAG大鼠的一般情况和胃窦组织病理学变化,修复胃黏膜的损伤状况,阻碍CAG发生癌前病变。2.隔药饼灸“中脘、气海”穴可降低CAG模型大鼠胃窦组织高表达的p-akt、PIP2、MDM2蛋白和异常升高的P53m RNA表达水平,上调CAG大鼠胃黏膜异常降低PTEN、Caspase-9m RNA及蛋白的表达。3.隔药饼灸通过调控CAG大鼠胃窦组织PTEN/PI3K/Akt信号通路,有效控制CAG的胃黏膜损伤,是隔药饼灸改善CAG和防治癌前病变的效应机制之一。