【摘 要】
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来自芽孢杆菌属的一个新种贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,因能产生多种次生代谢产物而具备广谱抑菌活性,可以抑制多种农业病原真菌,并显著改善土壤环境,增强土壤肥力,维持土壤生态的稳定,具有成为新型菌剂的巨大应用潜力。为解析贝莱斯芽孢杆菌的抑菌机制,开展提高抑菌物质产量等研究,需要通过基因工程技术对该菌株进行遗传改造,但目前关于贝莱斯芽孢杆菌的遗传转化体系尚未见报道。本研究以一
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来自芽孢杆菌属的一个新种贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,因能产生多种次生代谢产物而具备广谱抑菌活性,可以抑制多种农业病原真菌,并显著改善土壤环境,增强土壤肥力,维持土壤生态的稳定,具有成为新型菌剂的巨大应用潜力。为解析贝莱斯芽孢杆菌的抑菌机制,开展提高抑菌物质产量等研究,需要通过基因工程技术对该菌株进行遗传改造,但目前关于贝莱斯芽孢杆菌的遗传转化体系尚未见报道。本研究以一株具备良好生防效果的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis NSZ-YBGJ001）为实验材料,探索建立遗传转化体系的方法,为贝莱斯芽孢杆菌的深入研究提供基础操作平台。具体研究内容如下:1.通过生物信息分析得出B.velezensis NSZ-YBGJ001菌株的限制性修饰系统为Ⅰ型,经甲基化转移酶进行DNA甲基化修饰。2.通过Overlap PCR及同源重组法将克隆的甲基化转移酶基因、同源臂及筛选抗性等片段连接,得到整合质粒pMS。3.将线性化的整合质粒pMS以同源重组方式整合到枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis SCK6基因组上,得到含有B.velezensis NSZ-YBGJ001内源性甲基化转移酶的中间修饰菌株B.subtilis SCK6MS。4.在B.subtilis SCK6MS菌株中进行甲基化修饰后的外源质粒（含GFP基因）成功电击转化B.velezensis NSZ-YBGJ001,紫外灯下重组菌株发出绿色荧光,显示GFP活性。Dot-blot和LC-MS/MS验证结果进一步表明SCK6MS中间修饰菌株发挥了B.velezensis NSZ-YBGJ001的甲基化修饰作用。综上,本研究成功建立了贝莱斯芽孢杆菌B.velezensis NSZ-YBGJ001的遗传转化体系,为B.velezensis NSZ-YBGJ001从基因改造方向的深入研究提供基础操作平台。
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