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目的:口腔癌是最常见的头颈部恶性肿瘤之一。根据组织学类型,鳞状细胞癌占口腔癌90%以上,起源于口腔粘膜衬里。尽管诊断和治疗方法已显著改善,口腔鳞状细胞癌患者的5年总生存率仍为50%,因此积极寻找口腔鳞状细胞癌新的治疗靶点显得尤为重要。HOXC13反义RNA（HOXC13-AS）是长链非编码RNA的一员,长链非编码RNA在基因调控中发挥作用,可以影响基因剪接、调节转录因子、招募染色质修饰酶以及作为microRNA海绵。已有研究发现HOXC13-AS在鼻咽癌样品中上调并通过调节miR-383-3p/HMGA2信号轴促进鼻咽癌细胞侵袭、增殖和转移。此外,还发现了 HOXC13-AS在乳腺肿瘤样本中过度表达,并且HOXC13-AS的过度表达通过作为miR-497-5p海绵诱导细胞生长。然而,目前还没有关于HOXC13-AS在OSCC中的作用及相关作用机制的报道。本研究对HOXC13-AS在口腔鳞状细胞癌中的表达水平及对癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响进行研究,并深入探索其上下游相关靶标,从分子水平为口腔鳞状细胞癌患者的治疗与诊断提供新思路。研究方法:1.在TCGA、GEPIA数据库中研究HOXC13-AS和HOXC13在头颈部鳞状细胞癌（HNSC）样本中的表达情况。取4株口腔鳞状细胞癌细胞系Fadu、TSCCA、HSU3、SCC15以及人类正常口腔上皮细胞系NHOK,利用实时定量PCR检测HOXC13-AS和HOXC13的相对表达量,分别选取相对表达量较高的2株细胞系进行后续实验。2.选取HSU3及SCC15细胞为研究对象,将两株细胞经si-HOXC13-AS#1、si-HOXC13-AS#2、si-HOXC13-AS#3转染后,与经si-NC转染的细胞对照,实时定量PCR检测HOXC13-AS的表达量。选取表达量相对较低的2株转染细胞进行后续实验。3.沉默HOXC13-AS的表达后,用CCK-8法及EdU检测OSCC细胞增殖活性,Transwell迁移实验评估OSCC细胞迁移情况,Western blot检测OSCC细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白的相对表达情况,实时定量PCR和Western blot检测OSCC细胞中HOXC13的相对表达量。4.通过UCSC基因组浏览器揭示HOXC13-AS与HOXC13基因组位置,用starBase分析研究HNSC样本中HOXC13-AS与HOXC13的相关性。GEPIA研究HOXC13在HNSC样品中的相对表达量。沉默HOXC13-AS的表达后,构建HOXC13启动子报告质粒共转染293T细胞,双荧光素酶报告基因实验检测HOXC13的相对表达情况。利用细胞核质RNA分离实验和FISH染色检测HOXC13-AS在SCC15和HSU3细胞核和细胞质中的相对表达情况。5.将pcDNA3.1/HOXC13转染至HOXC13-AS沉默后的 SCC15和HSU3 细胞内,以实现过表达HOXC13,同时利用CCK-8和EdU实验检测细胞细胞增殖活性,Transwell迁移实验评估细胞迁移情况,实时定量PCR检测HOXC13的相对表达量,Western blot检测HOXC13-AS沉默后再过表达HOXC13的HSU3及SCC15细胞中HOXC13、E-cadherin和N-cadherin蛋白的相对表达情况。6.结合IncBase发现miR-122-5p和miR-378g是HOXC13-AS和HOXC13 共享的潜在miRNAs,实时定量PCR检测miR-122-5p和miR-378g在正常口腔角化细胞和4中OSCC细胞系中的相对表达情况。免疫共沉淀实验检测miR-378g与HOXC13-AS、HOXC13 的相互作用。从 lncBase和starBase 中获得miR-378g在HOXC13-AS和HOXC13上的结合位点。并采用双荧光素酶报告系统验证HOXC13-AS和HOXC13与miR-378g靶向关系。7.实时定量 PCR检测miR-378g mimic/NC mimic转染 SCC15和HSU3细胞后HOXC13的表达情况。实时定量PCR和Western blot检测经si-HOXC13-AS#1沉默并与miR-378g inhibitor共转染后HOXC13的相对表达情况8.随机选取郑州大学第一附属医院收集的56组配对口腔鳞状细胞癌样本及癌旁组织口腔组织样本,实时定量PCR检测56配对样本中HOXC13-AS、HOXC13及miR-378g的表达情况。Pearson相关性分析HOXC13与 HOXC13-AS、HOXC13与miR-378g的表达相关性。结果:1.在头颈部鳞状细胞癌（HNSC）样本相对于正常样本中HOXC13-AS表达水平升高。RT-qPCR数据显示HOXC13-AS和HOXC13在人类口腔鳞状细胞癌的OSCC细胞株中表达水平高于正常细胞株,并且在OSCC细胞系SCC15、HSU3中HOXC13-AS表达水平更高。2.敲降HOXC13-AS时,si-HOXC13-AS#1/2具有更高的敲降效率。3.CCK-8、EdU、Transwell迁移实验结果显示,沉默HOXC13-AS可抑制SCC15和HSU3细胞的增殖和迁移能力。此外,Western blot结果显示,抑制HOXC13-AS表达后,可使E-cadherin表达上调,并下调N-cadherin的表达,即沉默HOXC13-AS抑制了 OSCC细胞的EMT。4.双荧光素酶告基因实验结果显示,敲降HOXC13-AS对HOXC13的转录没有影响。胞核质RNA分离实验和FISH染色证实HOXC13-AS主要表达于SCC15和HSU3细胞的细胞质中。5.CCK-8、EdU、Transwell迁移实验及 Western blot 结果证实在 HOXC13-AS沉默后的OSCC细胞中,HOXC13的过表达可恢复OSCC细胞中HOXC 13 mRNA和蛋白质水平的下降,并消除对OSCC细胞增殖和迁移作用的抑制。6.实时定量PCR结果证实在OSCC细胞中,miR-378g表达下调,而miR-122-5p没有明显下调。免疫共沉淀实验实验证实在OSCC细胞中,miR-378g与HOXC13-AS、HOXC13存在相互作用的结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果证明在OSCC细胞中HOXC13-AS和HOXC13的野生型荧光素酶活性被miR-378g的过表达降低,而突变型的荧光素酶活性不受影响,即miR-378g与HOXC13-AS、HOXC13存在相互作用的结合位点。7.实时定量PCR结果证实在OSCC细胞中miR-378g的过表达显著降低了HOXC13的表达,实时定量PCR和Western blot结果证实,敲降HOXC13-AS后,HOXC13的mRNA和蛋白水平表达水平下调,并且这种下调作用能被miR-378g抑制剂恢复。8.实时定量PCR结果证实在56对OSCC配对样本中,HOXC13-AS和HOXC 13高表达,而miR-378g低表达。Pearson相关性分析证明了在56对OSCC配对样本中,HOXC13和HOXC13-AS表达呈正相关,而与miR-378g表达呈负相关。结论:1.HOXC13-AS在OSCC细胞中上调并促进OSCC细胞的增殖、迁移和EMT。2.HOXC13-AS在OSCC细胞转录后水平上调HOXC13的表达。3.HOXC13-AS通过上调HOXC13的表达来促进OSCC细胞的增殖、迁移和EMT。4.HOXC13-AS通过竞争性结合miR-378g上调HOXC13的表达。5.HOXC13-AS通过调控miR-378g/HOXC13参与OSCC细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡过程,影响OSCC的发生与发展进程。