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研究背景与目的斑秃(alopecia areata,AA)是皮肤科门诊常见的以毛囊为靶器官的慢性炎症性疾病,一般无自觉症状且患处皮肤正常。斑秃不仅影响一个人的外貌,往往也给患者的心理带来很大的负面影响。目前普遍认为AA是在一定的遗传背景基础上,外界环境的诱发下引起的一种由T淋巴细胞介导的自身免疫性疾病,涉及毛囊免疫豁免权的崩溃、细胞毒性免疫细胞识别毛囊相关自身抗原并产生免疫应答等多种因素,多种细胞及细胞因子均可能在AA的发生发展中起重要作用。其中,Treg细胞(调节性T细胞)是CD4+T细胞亚群之一,在调节自身耐受性、肿瘤免疫、抗微生物耐药性、过敏和移植排斥等方面发挥重要作用,研究发现Treg细胞可能参与AA的发病,且CD39+Treg细胞比CD39-Treg细胞作用更强。尽管近年来Treg细胞是研究热点,但AA患者外周血中CD39+Treg细胞的绝对值水平鲜有报道,因此,本文检测了 AA患者外周血中CD39+Treg细胞的绝对值,旨在对AA免疫相关机制进行探讨和补充。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种Th1型促炎性细胞因子,与多种自身免疫性疾病如银屑病、系统性红斑狼疮(SLE)等有着密切的联系。先前有研究表明某些TNF-α基因多态性与AA相关。事实上,其在AA中的确切功能尚不十分明确,并且仍然存在争议。TNF-α可能参与AA的发生,但阻断TNF-α亦可能诱发或加重AA。干扰素-α(IFN-α)是另一种主要由浆细胞样树突状细胞(PDCs)分泌的Th1型细胞因子,目前已有多项研究证实IFN在炎症性疾病如SLE、扁平苔藓等中的作用。而在IFN-α-2b和利巴韦林治疗丙肝病毒感染期间继发AA或普秃(AU)的病例则提示了IFN-α在AA发生中的作用。TNF-α和IFN-α广泛参与各种自身免疫性疾病的发病机制,并具有相互关系。AA患者血清TNF-α和IFN-α水平之间的相关性及其与AA严重程度、疾病活动性和病程长短的关系尚未得到充分研究。本研究的目的是检测AA患者的血清TNF-α和IFN-α水平,阐明这两种细胞因子之间是否存在平行或相互关系,并评估两种细胞因子水平与疾病严重程度、疾病活动性和病程长短之间的关系。资料与方法纳入符合Oslen斑秃指南诊断标准的20例AA患者,并排除其它病因引起的脱发以及合并其他自身免疫性疾病者。将纳入的20例AA患者分为轻型AA组与重型AA组、活动期AA组与稳定期AA组、≦6个月组与>6个月AA组,分别应用流式细胞术和酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血中CD39+Treg细胞的绝对值及血清TNF-α、IFN-α的水平,并与20例健康志愿者进行比较。对实验所得的数据采用SPSS21.0软件进行统计学处理。正态分布的计量资料以均数±标准差(X±S)表示,两独立样本均数间的比较行t检验(方差不齐时行t’检验),不满足正态的以中位数(25%分位数,75%分位数)[M(P25-P75)]表示,用曼-惠特尼秩和检验,p<0.05时差异有统计学意义,相关分析采用spearman检验,作图用 GraphPad Prism8.0.2。结果1 外周血CD39+Treg细胞绝对值AA组患者外周血CD39+Treg细胞绝对值高于对照组,且轻型AA组和重型AA组、活动期组和稳定期组、病程>6月组和≦6月组AA患者CD39+Treg细胞绝对值均高于对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。轻型AA组和重型AA组之间、活动期组和稳定期组之间、病程>6月组和≦6月组之间外周血CD39+Treg细胞绝对值差异无统计学意义(p>0.05)。2 血清TNF-α水平及IFN-α水平AA组患者血清TNF-α水平高于对照组,差异无统计学意义。轻型AA组和重型AA组、活动期组和稳定期组、病程>6月组和≦6月组AA患者及其与对照组之间血清TNF-α水平差异均无统计学意义(p>0.05)。AA组患者血清IFN-α水平高于对照组,且重型AA组显著高于对照组及轻型AA组,活动期组、病程≦6月组均高于对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。轻型AA与对照组之间、稳定期组与活动期组之间、稳定期组与对照组之间、病程>6月组与病程≦6月组之间、病程>6月组与对照组之间血清IFN-α水平差异无统计学意义(p>0.05)。3 相关性分析AA患者血清TNF-α与IFN-α水平呈正相关(r=0.621,p=0.003),AA患者外周血CD39+Treg细胞绝对值与血清TNF-α(r=-0.178,p=0.454)、IFN-α(r=0.26,p=0.268)水平之间未见明显相关性。结论1.斑秃患者外周血CD39+Treg细胞的绝对值及血清TNF-α、IFN-α水平均异常升高,三者均可能参与了斑秃的免疫调节过程。2.斑秃患者血清TNF-α与IFN-α水平呈正相关,表明二者相互作用,共同参与斑秃的发病过程。此外,IFN-α可能与疾病的严重程度有关。