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菊苣酸和绿原酸是存在于天然药用植物中的两种重要的酚类化合物,由于其具有较好的生理和药理活性,它们已经广泛应用于医药、保健品等很多行业。目前,分离和纯化这两种单体化合物的方法主要包括层析色谱、柱色谱和高速逆流色谱法,但是,由于天然药用植物中成分比较复杂和结构类似物的存在,导致这些方法具有耗时长、溶剂消耗量大和操作繁琐等缺点。因而,迫切需要一种快速、简便和高效的方法从天然药用植物分离纯化主要化合物。本文运用原位聚合的方法制备菊苣酸和绿原酸分子印迹聚合物,并将聚合物作为固相萃取的吸附剂填料用于天然药用植物中这两种化合物的分离纯化。 (1)以金属锌离子为枢纽制备分子印迹聚合物用于解决菊苣酸分子由于分子内氢键难以印迹的方法,成功地从苦苣(Cichorium intybusL.)根粗提物中分离纯化出菊苣酸。分别以菊苣酸为模板,4-乙烯基吡啶为功能单体,醋酸锌为金属枢纽在离子液体中制备出菊苣酸印迹整体柱。色谱评价结果表明,通过比较加入和不加锌离子制备分子印迹聚合物的印迹因子,证明锌离子的加入有助于显著提高印迹聚合物对菊苣酸分子的印迹效应。当菊苣酸/Zn2+/4-乙烯基吡啶的摩尔比为1∶2∶24时,所得到最高的印迹因子为24.81。另外,将此条件下得到的菊苣酸印迹聚合物作为固相萃取柱的吸附剂填料并用于苦苣粗提物的分离,最优的淋洗和洗脱试剂为乙腈-甲酸-水(90∶2∶8,v/v/v)各10mL,从苦苣粗提物中得到的菊苣酸的纯度和回收率分别为98.0%±0.5%和77.5%±2.5%(n=6)。 (2)离子液体诱导的分子印迹整体柱用于超快速在线分离和纯化。以绿原酸为模板,4-乙烯基吡啶为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂,离子液体/二甲亚砜为致孔剂,偶氮二异丁腈为引发剂,混合后得到预聚混合物,超声后装入不锈钢柱中,密封水浴60℃反应18h后得到绿原酸印迹整体柱。最优化条件下所得到的整体柱对绿原酸最高的印迹因子为9.68。通过选择性实验可以看出,绿原酸分子印迹整体柱对绿原酸的保留作用强于其类似物(没食子酸甲酯,异槲皮苷,3-羟基苯甲酸,秦皮乙素,槲皮素和原儿茶酸),证明整体柱对绿原酸有很强的特异选择性。另外,离子液体诱导的印迹整体柱具有很好的通透性(1.53×10-13m2)并允许高流速流过柱体,并将此绿原酸印迹整体柱用于超快速在线分离杜仲叶粗提物中的主要成分。当进样浓度和体积分别为6mg mL-1和50μL,流速为5.0mL min-1并在流动相为乙腈-乙酸钠缓冲盐(90∶10,v/v)的条件下,得到高纯度的绿原酸且回收率为89.01%±0.05%(n=3);另外,当粗提物进样量不超过50μL时,还可以获得另外一种化合物京尼平苷酸,其平均纯度和回收率分别为92.73%和67.72%。