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目的胰腺癌作为一种恶性度极高,早期诊断和治疗非常困难的消化道肿瘤,近年来发病率逐渐上升,然而目前缺少有效的治疗手段,发现困难且早期转移,在全球范围内其致死率相当高。大量研究证明胰腺癌发生发展过程中有很多基因发生表达活性的改变,其中包括miRNA,其通过与对应的靶基因相互作用来调节基因表达发挥致癌或者抑癌作用。其中miR-21在胰腺癌细胞系及人体组织中过表达,参与肿瘤细胞生长、侵袭和转移。血管生成是肿瘤生长和转移必不可少的要素之一,无论是进展期胰腺癌还是术后接受高强度抗癌治疗的残癌细胞,都要依靠血供继续生长。在胰腺癌发生发展中,miR-21与胰腺癌血管生成之间的具体机制尚需要进一步阐明。本课题从miR-21与胰腺癌血管生成环节入手,探讨miR-21调节胰腺癌血管生成可能存在的分子机制。为胰腺癌基因诊治提供理论依据及靶向治疗提供新思路。方法首先进行人胰腺癌细胞系培养,选取miR-21变化幅度大的MiaPaca-2细胞系作为研究对象,进行实验分组,分为miR-21正常表达组,miR-21敲低组,miR-21过表达组,c-Met阻断组,miR-21过表达同时c-Met阻断组五组;分别转染miR-21 neigative control,miR-21 inhibitor,miR-21 mimics,加入小分子抑制剂SGX-523,转染miR-21 mimics同时加入SGX-523;PCR技术检测miR-21抑制剂和拟似物处理后各组细胞中miR-21的变化;Western blot检测miR-21表达变化后对血管形成相关蛋白表达产生的影响;采用miR-21不同处理组细胞培养液直接培养血管内皮细胞HEMBC,观察各组血管内皮细胞的生长变化。紧接着在体内实验基础上进一步进行探讨,裸鼠成瘤实验检测五组胰腺癌荷瘤模型中肿瘤生长曲线及裸鼠基本生长情况的变化;免疫组化检测不同处理组裸鼠瘤块中VHL、HIF-1α、HGF、c-Met、pAKT、VEGF、CD31相关蛋白的变化;从体内外两个水平分析miR-21与胰腺癌血管生成的关系及相关分子机制。结果miR-21 mimics可显著提高miR-21表达水平,其反义寡核苷酸miR-21 inhibitor抑制miR-21的表达水平;miR-21升高时,HIF-1α、HGF、c-Met、CD31升高,miR-21降低时,HIF-1α、HGF、c-Met、CD31降低。miR-21不同表达水平的MiaPaca-2细胞培养液影响微血管内皮细胞HEMBC的生长,miR-21高表达水平可促进HEMBC生长,miR-21低表达可减缓HEMBC的生长,阻断c-Met可抑制HEMBC生长。体内实验表明,miR-21过表达时促进胰腺癌瘤块的生长,miR-21的表达水下降时肿瘤生长变缓;阻断c-Met可减慢胰腺癌肿瘤的生长。miR-21表达增加时,VHL降低,HIF-1α、HGF、c-Met、pAKT、VEGF、CD31升高;miR-21表达降低时,VHL表达升高,HIF-1α、HGF、c-Met、pAKT、VEGF、CD31表达降低。结论1、miR-21可以通过靶向抑癌基因VHL来调控HIF-1α,使得HGF、VEGF表达增加,进而刺激血管内皮细胞增殖、促进血管新生。故miR-21有正性调控胰腺癌血管生成的作用。2、miR-21有增加c-Met表达的作用,HGF/cMet信号通路阻滞剂SGX-523可以部分抑制血管生成作用,以上结果可以间接说明在不增加HGF量的情况下,miR-21能够放大HGF/c-Met/PI3K/AKT这一信号通路的作用。本研究从体内外实验基础上初步探究miR-21与胰腺癌血管生成的关系及相关分子机制,为胰腺癌血管生成研究及基因靶向治疗提供了新思路。