目的:通过探讨Nrf2能否通过mmu_circRNA₃2463调控α-SYN的表达,旨在补充Nrf2的调控机制,初步认识mmu_circRNA₃2463的功能,为今后进一步研究PD提供实验依据。方法:1.剥取Nrf2^-/-和Nrf2^+/+小鼠的黑质和纹状体组织,进行circRNA微阵列;随后用qRT-PCR技术验证微阵列结果的准确性。2.利用siRNA技术特异性敲低MN9D细胞中的Nrf2使用2种siRNA:siNrf2-1和siNrf2-2,分别用qRT-PCR和Western Blot技术检测Nrf2的敲低效率,选择作用较好的siRNA,免疫荧光细胞染色技术检测Nrf2的表达分布变化。3.MN9D细胞中敲低Nrf2对α-SYN表达的影响敲低Nrf2后,Western Blot和免疫荧光细胞染色技术检测α-SYN蛋白的表达变化;qRT-PCR技术检测α-SYN mRNA的表达变化。4.利用“TarBase v.8”和“RNAhybrid”生物信息学网站,查找可能调控α-SYN的上游circRNA分子。5.敲低Nrf2后,qRT-PCR技术检测MN9D细胞中mmu_circRNA₃2463的表达变化。6.利用siRNA技术特异性敲低MN9D细胞中的mmu_circRNA₃2463,qRT-PCR技术检测其敲低效率。7.MN9D细胞中mmu_circRNA₃2463对α-SYN的表达调控敲低mmu_circRNA₃2463后,Western Blot和免疫荧光细胞染色技术检测α-SYN蛋白的表达变化;qRT-PCR检测α-SYN mRNA的表达变化。结果:1.circRNA微阵列的结果与Nrf2^+/+小鼠相比,在Nrf2^-/-小鼠的黑质中有65个差异表达的circRNAs（DEcircRNAs）,其中36个上调和29个下调;纹状体中有150个DEcircRNAs,其中106个上调和44个下调。2.qRT-PCR的实验结果与circRNA微阵列结果一致3.MN9D细胞中Nrf2的敲低效率的检测qRT-PCR和Western Blot检测结果一致,即siNrf2-1和siNrf2-2均可降低Nrf2的表达,但siNrf2-2效果较好。免疫荧光细胞染色结果表明Nrf2敲低后,胞核和胞质中的Nrf2表达均降低,但胞质中更明显;Nrf2敲低组胞核内的Nrf2的表达明显高于胞质。4.MN9D细胞中Nrf2敲低对α-SYN表达的影响Nrf2敲低后,Western Blot和免疫荧光细胞染色结果表明,α-SYN蛋白表达水平显著增高;qRT-PCR结果表明α-SYN mRNA表达水平无变化。5.生物信息学分析结果表明mmu_circRNA₃2463可能作为一种miRNAs“海绵”调控α-SYN的表达。6.qRT-PCR结果显示:敲低MN9D细胞中的Nrf2,mmu_circRNA₃2463表达增加7.MN9D细胞中mmu_circRNA₃2463敲低对α-SYN表达的影响qRT-PCR结果表明,mmu_circRNA₃2463的敲低效率为72%。敲低mmu_circRNA₃2463后,Western Blot和免疫荧光细胞染色结果表明,α-SYN蛋白表达水平显著增高;qRT-PCR结果表明α-SYN mRNA表达水平无变化。结论:1.与Nrf2^+/+小鼠相比,在Nrf2^-/-小鼠的黑质和纹状体中分别获得了65和150个DEcircRNAs。2.MN9D细胞中,Nrf2的敲低可增加mmu_circRNA₃2462和α-SYN蛋白的表达,但对α-SYN mRNA无影响。3.MN9D细胞中,mmu_circRNA₃2462的敲低可降低α-SYN蛋白的表达,但对α-SYN mRNA无影响。