[目的]　　1.比较深圳市5岁以下哮喘患儿与对照组的外周血基因表达谱差异。　　2.对差异基因进行生物信息学分类，寻找小儿哮喘易感基因。　　[方法]　　于早上同一时间抽取3ml血液，在2小时内分离淋巴细胞，并保存于Trizol中，将7例哮喘患儿RNA合并为实验组，将8例呼吸系统炎症非哮喘患儿RNA合并为对照组，冰冻运输至深圳市欣海凌生物科技有限公司，进行样品总RNA提取和纯化及RNA、基因芯片的质量控制，RNA行逆转录，标记及纯化cDNA探针，本研究用cy3标记的探针标记实验组cDNA。　　NanoDrop ND-1000定量每个样本的RNA总量，样本琼脂糖凝胶电泳扫描评估RNA完整性。每个样本中有5μ RNA用于标记并通过以下步骤进行数据杂交:1)反转录（ds-cDNA合成工具箱）;2）ds-cDNA标记（单色DNA标记工具箱）;3)数据杂交（杂交系统）、洗涤（洗涤缓冲剂工具箱）;4）数据扫描（微点阵扫描仪）。扫描后的图像（TIFF格式）输入到软件（版本2.5）中进行制表及表达数据的分析。表达的数据经RMA(Robust Multichip Average)公式(NimbleScan软件)标准化，之后产生探针水平和基因水平的文件。所有的基因水平文件均输入到Agilent GeneSpring GX软件（版本11.5.1）中行进一步的分析。选取信号值≥50.0的基因作为差异基因进行后续的数据分析，通过聚类分析来揭示标本之间可辨识的基因表达谱，最后运用GO分析和Pathway分析用于测定这些差异表达基因的作用。　　[结果]　　1.RNA质控合格，基因芯片杂交结果清晰可靠，差异表达基因的评估（盒图、散点图、聚类分析）表明两组有明显不同的表达谱，能很好的区分。　　2.本实验在29890个基因中，发现4725个基因存在差异表达，其中1660个表达上调，3065个表达下调。GO分析发现，生物学过程中上调的基因主要涉及生物细胞过程、信号肽及信号转导的调节，下调的基因则主要涉及各种代谢过程的调节;细胞组分中，上调的基因偏重于胞外调节，而下调的基因则偏重于胞内调节;分子功能中没有明显的偏重。而Pathway通路分析共发现有88条通路，其中基因表达上调通路有22条，主要包括受体相互作用、肿瘤及黏附等方面，基因表达下调通路有66条，主要包括细胞毒性、细胞因子通路及一些免疫系统疾病方面。进一步对这些通路的差异表达基因进行分析发现有不少在3条以上的通路富集。　　[结论]　　1.实验组基因表达与对照组相比存在很大差异，这些差异基因涉及多种生物学过程，表明小儿哮喘的发病是一个复杂的病理生理过程。　　2.参与上述生物学过程中的差异表达基因，可作为临床检测标志。　　3.基因芯片以其高通量、平行检测、处理速度快等的特点成为筛查哮喘患儿差异表达基因高效快捷的工具。