致鱼细菌性败血症嗜水气单胞菌特异性卵黄抗体的制备及性能研究

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaobaihuo197992
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淡水鱼类细菌性败血症(Systemic Bacterial Septicemia)是目前我国水产养殖史上危害鱼的种类最多、流行水域最广、造成严重经济损失的一种急性传染病,已成为制约淡水鱼类养殖业健康发展的最主要疫病之一。常用的抗生素等化学药剂存在的许多弊端,使得寻找一种安全、高效的抗生素替代品成为一个亟待解决的问题。本研究以引起鱼类细菌性败血症的主要致病菌-嗜水气单胞菌(Aeromolla hydrophila, A. hydrophila)为抗原,免疫罗曼蛋鸡获得特异性IgY;IgY经分离、纯化后,测定其纯度、抗体效价以及特异性抗体的含量,并用体外抑菌,免疫荧光等实验对特异性IgY在体外对嗜水气单胞菌生长的抑制作用进行了研究;通过口服,浸泡和注射方式,考察特异性IgY对患细菌性败血症黑龙江银鲫的治疗和预防作用效果。研究结果表明,水稀释-盐析-凝胶过滤等方法提取纯化的特异性IgY纯度可达89.3%,水溶性组分(1:6稀释)中总IgY的含量为9.47 mg/mL,特异性IgY的含量随免疫时间的延长而显著增高,最高可达1.25mg/mL,占总IgY含量的13.19%;特异性IgY的效价最高可达1:12800。免疫荧光结果显示,特异性IgY与嗜水气单胞菌有较强的结合作用。体外抑菌实验结果显示75mg/ml特异性IgY,能显著抑制嗜水气单胞菌在液体培养基中的生长(P<0.05)。将特异性IgY与病原菌粗提液按1:1的比例混合,腹腔注射健康黑龙江银鲫的实验结果表明,与对照组相比特异性IgY组可降低感染鱼的累计死亡率40%左右。考察饲喂含不同比例特异性IgY的饲料对攻毒前后黑龙江银鲫的保护和治疗效果可见,添加5%特异性IgY的被动保护效果最佳,累计死亡率在50%左右;添加0.5%特异性IgY的治疗效果最差,累计死亡率为80%;考察用不同浓度的IgY水溶液浸泡黑龙江银鲫之后,用病原菌攻毒的保护效果和攻毒后用不同浓度的IgY水溶液浸泡鱼的治疗效果可见,浸泡于400mg/mL特异性IgY溶液的预防组效果最好,死亡率为30%;考察注射不同剂量的IgY后用病原菌攻毒的保护效果和攻毒后注射不同剂量IgY的治疗效果显示,注射4mg/尾特异性IgY的预防效果较好,死亡率为50%。在相同浓度剂量下,无论采用何种给药方式,预防效果都优于治疗效果。研究结果表明,制备的抗A.hydrophila特异性IgY对黑龙江银鲫的败血症具有一定的防治作用。
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