目的：探讨提高小鼠胞质内单精子注射(Intracytoplasmic sperm injection，ICSI)胚胎存活率的方法，在此基础上，将双精子注入去核卵母细胞中获得孤雄胚胎，建立孤雄胚胎干细胞(Androgenetic Embryonic Stem cells，AgES cells)，并检测多潜能基因和印记基因的表达情况。　　 方法：操作液中添加5μg/ml细胞松弛素(Cytochalasin B，CB)进行小鼠ICSI显微操作，观察CB对ICSI胚胎存活率和体内、外发育率的影响。利用去核卵母细胞双精子注射的方法构建孤雄胚胎，建立小鼠AgES细胞系，对其进行相关多潜能鉴定；采用Real-time PCR检测孤雄胚胎干细胞印记基因的表达。　　 结果：CB明显提高小鼠ICIS胚胎的存活率(89.50％vs.80.74％，p<0.05)，对其体内、外发育率均无不良影响。用去核卵母细胞双精子注射的方法成功构建孤雄胚胎，其胚胎存活率达84.48％，囊胚率20.24％；并用此方法建立2株孤雄胚胎干细胞系，建系率为18.18％；其细胞克隆形态与小鼠正常受精的。ES细胞(fertilized embryonic stem cells)fES类似，经鉴定该细胞系具有较高水平的碱性磷酸酶活性，表达细胞多潜能因子Oct4、SSEA-1，具有正常核型40/XY；体内、外诱导均可向三个胚层分化，并获得AgES细胞嵌合鼠。Real-time PCR方法结果显示，与fES细胞相比AgES细胞的多潜能基因表达有所下降；母源表达的印记基因H19、Asc12、Tss3表达降低，其他基因无明显差异。另外发现父源表达的印记基因Igf2和Mest表达升高，其余与fES细胞相比无明显差异。　　 结论：CB明显提高小鼠ICSI胚胎的存活率，且对其体、内外发育无不良影响；在此技术的基础上利用双精子注射法成功构建孤雄胚胎，建立与小鼠fES细胞系类似的AgES细胞系；AgES细胞的多潜能性存在一定的限制，呈现母源表达的印记基因的激活和父源表达的印记基因趋于fES细胞。