桔梗皂甙提取、纯化及对动物脂肪酶活力抑制作用的研究

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本文以桔梗为原料研究了桔梗皂甙提取的最佳方法。分别选用了冷浸法、热提法、醇提法、超声波—水提法提取桔梗皂甙,以桔梗皂甙提取率为指标,使用响应曲面优化桔梗皂甙最佳提取工艺。研究了桔梗皂甙分离纯化的方法。分别采用大孔树脂D-101、葡聚糖凝胶LH-20、葡聚糖凝胶G-15通过柱层析对桔梗粗皂甙进行分离纯化。并对纯化所得样品分别进行定性定量分析。对桔梗皂甙降血脂作用及对胰脂肪酶活性抑制作用进行了研究,得出以下结论:以超声波-水提法提取桔梗皂甙提取率最高。比传统回流加热的方法要节省大量时间,也节约了大量的试剂,可满足桔梗皂甙快速提取的要求。桔梗皂甙最佳提取工艺条件为:料液比1:9.75、超声温度35℃,超声时间31min。桔梗皂甙的纯化采用紫外可见分光光度计对人参皂甙Rg1标样进行光谱扫描,确定其最大吸收波长为20)1nm。分别对大孔树脂D-101、葡聚糖凝胶LH-20和葡聚糖凝胶G-15柱层析纯化得到的样品进行光谱扫描,最大吸收波长为199-205nm,与人参皂甙Rg1标样的最大吸收波长相近。证明采用大孔树脂D-101、葡聚糖凝胶LH-20和葡聚糖凝胶G-15对桔梗粗皂甙纯化均得到了桔梗皂甙。采用香草醛—高氯酸法绘制标准曲线,根据标准曲线对纯化样品进行定量分析。用大孔树脂D-101柱层析时,以70%乙醇作洗脱剂纯化效果最好,桔梗皂甙含量为0.031mg/mL。通过颜色反应验证桔梗皂甙为三萜皂甙。采用高效液相色谱的方法对桔梗皂甙和桔梗纯化样品进行测定,分析对应的光谱和色谱图,确定纯化样品中含有桔梗皂甙。研究桔梗皂甙的降血脂作用,选用雌性健康成年Wistar大鼠,观察大鼠体重和脂肪含量变化以及高脂血症大鼠血清脂质的变化。结果显示:桔梗皂甙具有降血脂作用。桔梗皂甙高剂量组能显著降低高脂血症大鼠的TG、TC水平(P<0.01)同时增加高脂血症大鼠HDL-C水平。对LDL-C水平也有降低作用。通过桔梗皂甙对胰脂肪酶活性抑制的体外实验,以三酸甘油酯释放油酸率为指标,确定了桔梗皂甙对胰脂肪酶活性作用为:即当反应液桔梗皂甙浓度500μg/mL时,对胰脂肪酶的抑制活性最大,且最大抑制率为42.5%。
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