福州若干野生蕉ISSR分析、离体繁殖及APX克隆与表达分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zxg520
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
香蕉(Musa spp.)是世界四大水果之一,同时也是重要的粮食作物,具有重大的经济价值,但常常遭遇低温等伤害,造成了不可估量的损失。因此加快培育出抗寒新品种成为了亟需解决的问题。而福建省具有丰富的优良抗性的野生蕉资源,可以为香蕉育种提供宝贵的种质资源和基因资源。因此急需开展对野生蕉离体繁殖和遗传背景的研究,进一步挖掘和利用野生蕉优良的抗性基因,完善香蕉抗寒性研究理论,为培育和改良香蕉新品种提供新的途径和奠定理论基础。本研究以福州晋安区的若干野生蕉为材料,在实验室前期研究的基础上,主要进行了日溪野生蕉遗传多样性的ISSR分析,宦溪野生蕉离体保存条件的研究,宦溪野生蕉APX家族基因的克隆、定量表达分析以及转化烟草等研究。主要结果如下:1福州日溪野生蕉自然群体遗传结构的ISSR分析本试验以福州市日溪乡自然居群的38份野生蕉样品为材料,采用ISSR分子标记并结合相关软件进行遗传结构分析。试验结果表明:筛选的13条引物共扩增得到116条DNA条带,多态性条带为70条,多态性条带百分率为60.34%,表明福州日溪野生蕉自然群体具有较高水平的遗传多样性;结合NTSYS和STRUCTURE聚类分析将38份野生蕉样品划分为6大类,结合Q值分析表明,福州日溪野生蕉群体内部存在着一定的遗传信息交流。2光质对福州宦溪野生蕉离体繁殖的影响以实验室继代保存的宦溪野生蕉组培苗为材料,研究不同光质(红光、蓝光、绿光、紫光、白光、黄光)对宦溪野生蕉组培苗的离体繁殖的影响。结果表明:1.白光条件下宦溪野生蕉增殖效果最好,红光下更有利于野生蕉的离体保存,其他光质培养下的组培苗形态会产生非正常变化。2.不同光质下叶绿素含量的测定白光处理下叶绿素含量最高。3.不同光质条件下测定的POD酶活性大小依次为:红光>紫光>绿光>黄光>蓝光>白光;而CAT酶活性大小则为:白光>黄光>紫光>蓝光>绿光>红光。3福州宦溪野生蕉APX家族基因克隆及生物信息学分析从宦溪野生蕉中分离得到APX家族基因7个成员的cDNA完整序列。其全长序列长度为1031 bp-1473 bp,编码氨基酸数目为249-426个。生物信息学分析表明:APX家族基因7个成员均是无信号肽的非分泌亲水蛋白,APX1-1、APX1-2和APX1-3蛋白稳定,其他四个不稳定;亚细胞定位预测表明:APX1-1、APX1-2、APX1-3定位于过氧化物酶体;APXS-1定位于线粒体基质空间;APXT-1定位于线粒体内膜和细胞质膜;APX4-1定位于内质网;APX4-2定位于细胞质膜;APX家族基因7个成员均具有KatG,PRK15061的保守结构域,属于plant_peroxidase_like超家族,其中APX1-2还属于ApbE superfamily超家族。APX1-2、APX1-3和APXS-1不存在跨膜结构,其他成员多具有由内向外的跨膜结构,磷酸化修饰以丝氨酸为主,苏氨酸和酪氨酸含量较少。二级结构由α螺旋、p转角、无规则卷曲以及伸展构象组成,其中以α螺旋和无规则卷曲为主,伸展构象次之,β转角所占比例最少。APX家族基因7个成员均有卷曲螺旋结构,三维结构近似球型。序列比对和系统进化分析表明:APX家族7个基因成员同源性较低,亲缘关系较远,预测APX家族基因成员的功能不同或具有协同作用。4福州宦溪野生蕉APX家族基因在不同温度下定量表达分析试验对宦溪野生蕉组培苗在不同温度下下的表达模式进行分析,结果表明:APX家族基因7个成员在不同温度下均有表达且表达模式不尽相同。APX1-1、APX1-3和APX4-2表达量变化呈“倒U型”;APXS-1和APXT-1在13℃处理下表达量达到极值,呈现“降-升-降-升”的模式;APX4-1呈现“先降后升”的模式;APX1-2则呈现“U型”表达模式,在28℃和0℃下均大量表达。5.福州宦溪野生蕉MuAPX1-2转化烟草研究本试验采用酶切连接法成功构建了MuAPX1-2基因的正义和反义-pCAMBIA 1301-(±)-Mu-APX1-2表达载体,成功转化到农杆菌EHA105感受态细胞中。采用农杆菌介导法转化烟草,对转基因烟草植株进行PCR检测和GUS检测,最终获得正义转化烟草17株,反义转化烟草20株,转基因植株阳性率为69.81%。目前已经获得了正义和反义TO代转基因烟草种子。
其他文献
2012年3月2日,由上海市文化广播影视管理局主办,上海大学影视学院暨上海市第三期重点学科电影学(S30103)承办的“上海电影新青年——上海新导演作品展映与产业推进系列计划”
美国黑核桃属于核桃科(Juglandaceae)、核桃属(Juglans L.)。因其木材坚硬、结构紧密、花纹优雅、色泽美观及果实风味浓厚,营养丰富而成为美国经济价值最高的材果兼优树种。但
本试验通过对梨S系矮化砧离体再生培养过程的研究,筛选出了直接诱导再生的适宜外殖体和诱导时期,提出了试管苗继代增殖、生根、驯化移栽和微嫁接的主要影响因子。建立了梨S系矮
虾青素(astaxanthin)是一种氧化性酮式类胡萝卜素,最新的生理学和药理学研究发现,它具有很强的生物抗氧化活性,被称为“超级维生素E”。虾青素可以解除光诱导产生的氧化胁迫,有很强
目的探讨在大肠癌手术中行近端肠管结扎的价值。方法回顾性分析2009年1月至2014年1月行腹腔镜大肠癌手术的121例患者的临床资料,随机分为结扎组60例,未结扎组61例,手术方式均
本试验对10份不同品种(系)青花菜的生育期、植株形态及各品种三种主要器官中的主要营养品质进行比较分析,并按照不完全双列杂交法配置了12个杂交组合,对F1的主要品质性状及其
2015年7月2~5日,第九届中国肿瘤内科大会和第四届中国肿瘤医师大会将于北京国家会议中心举行。本次会议的主题是:“聚焦精准癌症医疗,完善肿瘤诊疗体系”。内科治疗是恶性肿
该实验以中国农业大学园艺植物研究所筛选到的一个苹果铁高效基因型——小金海棠(Malus xiaojinensisCheng et Jiang)为试材,分别克隆了小金海棠的抗缺铁相关基因MxNramp1基
为研究蔬菜硝酸盐积累的机制,并找出一定的栽培措施以降低蔬菜的硝酸盐含量,本研究通过水培试验,探讨了不同基因型、不同氮肥水平、不同氮素形态配比及生长后期不同供氮方式对叶
本试验以‘四季蜜’、‘立冬本’龙眼嫁接新梢及‘红核子’龙眼叶芽为材料,研究不同龙眼品种中SVP同源基因序列的差异(包括基因序列的可变剪切)及表达差异,探究龙眼SVP同源基