【目的】探讨庆大霉素对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC)的损伤机制。【方法】取出生后2～6天昆明种乳小鼠耳蜗,利用酶消化和机械分离相结合的方法分离出SGC,并进行体外培养。将培养4天的SGC用4%多聚甲醛室温固定30min,以小鼠源神经纤维细丝蛋白(Neurofilament-68/200Kda,NF-L+H)单克隆抗体作为一抗,按照SP法对所培养细胞进行免疫细胞化学染色,对SGC作出鉴定。将培养第4天的细胞分为4组:空白对照组及3种浓度的庆大霉素干预组(庆大霉素终浓度分别为50mg/L、100mg/L、150mg/L),作用48h后对各组细胞进行透射电镜观察以及凋亡效应蛋白Caspase-3免疫细胞化学染色,染色结果用图像分析系统及SPSS统计学软件进行定量分析。【结果】SGC原代培养获得成功,一般有相对生长的两个突起,为典型的双极神经元,经NF-L+H抗体免疫细胞化学染色,其胞质及突起均呈阳性反应,染成棕黄色。在透射电镜下观察SGC超微结构,3种浓度的庆大霉素组SGC与空白对照组相比,均出现明显的形态学改变,以细胞核和线粒体为著,这种改变与凋亡相关。庆大霉素组SGC出现明显的凋亡效应蛋白Caspase-3阳性反应,与空白对照组相比,有显著性差异,且随着庆大霉素浓度的增高,Caspase-3阳性反应程度也升高。【结论】庆大霉素对小鼠耳蜗SGC有直接毒性作用,可导致SGC凋亡,线粒体损伤在这一过程中可能具有重要意义。Caspase-3的激活参与了庆大霉素致SGC凋亡过程。