玉环文旦柚(Citrus maxima (Burm.) Merr. cv. Wentan)柚果含有多种人体健康必需的营养成份和非营养性生理活性成份,具有降血脂、降胆固醇、预防动脉粥样硬化、抗氧化、促进胃肠蠕动、通便等保健作用。其果皮中更是存在种类繁多、含量丰富的黄酮类化合物,且具有多种生理功能和较大的药用价值。而在国内,加工产生的果皮除少数用于中药和制取香精油外,大部分作为垃圾处理,未加以合理利用。本文系统研究了玉环柚中黄酮类化合物的提取和分离纯化方法及不同品种柚皮中黄酮类化合物种类及量的差别,旨在建立一套科学可靠的柚皮中黄酮类化合物的研究方法,为我国柑橘属中黄酮类化合物的研究工作提供更详实的信息和依据。通过柚子指纹图谱的研究,从柚子黄酮指纹图谱中可获取不同品种的柚子中黄酮类化合物基本组成成分情况的信息,为柑橘属中黄酮类化合物的研究提供科学可靠的数据。现将主要研究内容及结果报告如下:(1)将微波辅助提取技术运用到柚皮黄酮的提取中,考察料液比、乙醇浓度、提取温度、提取时间、提取功率5个参数对提取率的影响,应用响应面优化法,获得最优工艺条件:提取时间35 min,提取温度55℃,液料比34.74,乙醇浓度70%,提取功率500 W,提取2次。实测黄酮提取率与预测值基本一致,提取率达0.805%。(2)运用本实验室液相色谱仪分析玉环文旦柚黄酮类化合物的液相色谱洗脱条件:流动相A甲醇,B水+0.1%乙酸(0-80min,A 0-100%,B 100-0%)。流速1mL/min,紫外检测器为Waters 2487检测器,检测波长254 nm,进样量:5μL,Waters C18柱。并运用中药色谱指纹图谱相似度评价体系对十种不同种类的柚皮黄酮类化合物样品进行黄酮色图谱分析,建立了柚皮黄酮对照指纹图谱。11个色谱峰为10批次供试品的共有指纹峰,是鉴别柚皮黄酮样品的必要条件之一,可以确定为黄酮的基本组成成分。试验结果说明,10批次柚皮黄酮样品基本上均含有相同的主要成分,从而标定了柚皮中有效部位的共有指纹峰。(3)对柚皮的正丁醇层黄酮粗提物进行分离纯化,建立逆流色谱分离条件,其色谱条件为:正己烷:丁醇:甲醇: 0.5%乙酸溶液=1:3:1:4(v/v),上相为固定相,转速850rpm/min,流动相流速为1.5mL/min,进样量为500mg。结合半制备型液相色谱进行再次纯化,条件为:流动相A-乙腈B-水(0.5%乙酸()0-5 min A 5-22%,6-21 min A 22-60%,21-30min A 60-100%)运行时间30 min,流速5 mL/min,紫外检测波长254 nm,Waters C18柱。结果获得一种未知化合物,经过高效液相色谱分析得纯度为98%。(4)对分离到的未知化合物进行化学鉴别和结构分析,通过显色反应和紫外扫描可确定该未知化合物是黄酮类化合物。通过液质联用分析此未知化合物的分子量为377,并初步确定该化合物的质谱裂解途径;通过氢核磁共振法,初步确定该化合物是一种黄酮醇,并且对其结构作了进一步分析。