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丙酮酸激酶是催化糖酵解的最后一步不可逆终反应，在糖酵解途径起着重要作用。本研究分离了枇杷丙酮酸激酶基因全长序列，对其进行了亚细胞定位分析，并研究了该基因及其编码蛋白质与果实糖积累的关系，构建双元表达载体转化烟草，获得了烟草转基因植株，并对转基因植株进行了鉴定，初步明确了枇杷丙酮酸激酶的功能。主要研究结果如下：采用RT-PCR及RACE技术分离到枇杷丙酮酸激酶全长cDNA序列，命名为EjPK。EjPK的长度为1884bp，含有161bp的5’UTR区，193bp的3’UTR区和1530bp的编码区，共编码510个氨基酸。序列分析显示，EjPK的核酸序列和氨基酸序列与其他已经报道的植物细胞质丙酮酸激酶有78%—84%的相似性。EjPK属于细胞质丙酮酸激酶的一个分支，与葡萄、大豆、柑橘细胞质丙酮酸激酶在系统进化中亲缘关系较近。以CaMV35S为启动子，将EjPK的ORF区连接到植物表达载体pCAMBIA-1302的GFP编码区的上游，构建成含有GFP的双元表达载体。利用基因枪，将重组质粒转化洋葱表皮细胞。在激光共聚焦显微镜下观察GFP信号，共聚焦成像的GFP荧光显示，35S:EjPK-GFP融合蛋白主要在细胞质中，细胞膜和细胞核中也有少量表达，但质体中没有发现荧光信号。利用HPLC测定分析白沙(软条白沙)和红沙（宝珠）两个不同枇杷品种不同发育时期果实的糖组成成分、不同时期各种糖类的含量和果实有机酸组分。结果表明，果实中糖有蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨醇，果糖和葡萄糖随着果实的成熟而增加，蔗糖的含量变化波动幅度小，山梨醇含量随着果实成熟而减少。果实中有机酸的总量逐渐增加，后期有所下降。枇杷果实中的有机酸主要有苹果酸、柠檬酸、奎宁酸、α-酮戊二酸、琥珀酸和草酰乙酸。通过荧光定量RT-PCR分析显示，EjPK在枇杷的叶，根，茎，花，果实等中均有表达。在果实发育阶段中，EjPK的表达在前期较低，后期水平显著上升，之后随着酸的消耗开始迅速下降。通过农杆菌介导法转化烟草获得EjPK转基因烟草植株，对转基因植株进行了观测鉴定。与野生型烟草植株相比，过量表达。丙酮酸激酶的植株提早开花，含糖量在早期有所改变，但是后期与转基因植株相比没有显著差异。本实验获得的研究结果为探索丙酮酸激酶在糖代谢积累方面的调控作用提供了理论基础，为研究枇杷果实品质形成机理增加了新内容。