论文部分内容阅读
火麻仁为桑科植物大麻（Cannabis sativa L.）的种仁,有着悠久的药用历史。本研究以本实验室从火麻仁中提取的水溶性多糖（Hemp seed polysaccharide,HSP）为研究对象,结合环磷酰胺（cyclophosphamide,Cy）诱导小鼠肠道黏膜损伤模型的体内实验和双氧水诱导肠上皮细胞IPEC-1损伤模型的体外实验,探明火麻仁多糖对肠道黏膜损伤的保护作用及可能的作用机理,为开发以火麻仁多糖为功效因子的保健食品、改善药物所致肠道黏膜损伤提供理论依据。目的:（1）探讨火麻仁多糖对环磷酰胺致小鼠肠道黏膜氧化损伤的保护作用（2）探讨火麻仁多糖对环磷酰胺致小鼠肠道免疫抑制的保护作用（3）探讨火麻仁多糖对环磷酰胺致小鼠肠道黏膜结构损伤的保护作用及相关机制（4）探讨火麻仁多糖对H2O2诱导IPEC-1细胞氧化损伤的保护作用方法:（1）通过连续四天腹腔注射环磷酰胺建立小鼠肠道黏膜损伤的动物模型,通过检测如下指标:小鼠体重及脏器指数、胸腺、脾脏组织形态变化、空肠组织形态和超显微结构、杯状细胞的分布与数量、肠道通透性、小肠灌洗液sIgA含量、血清、肝脏和回肠组织匀浆液中抗氧化因子和细胞因子水平、回肠组织中相关抗氧化因子和细胞因子mRNA表达、回肠组织紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1和黏蛋白mucin-2 mRNA表达水平和Nrf2-Keap1通路和NF-κB通路上蛋白表达水平。（2）通过以H2O2为氧化应激源建立肠上皮细胞IPEC-1体外氧化应激损伤模型。采用MTT法检测HSP对IPEC-1细胞增殖能力,酶标法测IPEC-1细胞的相关抗氧化酶活力水平、RT-qPCR法测相关抗氧化酶mRNA表达,Western blot检测Nrf2-Keap1通路上蛋白表达水平。结论:（1）提前灌胃火麻仁多糖对环磷酰胺致小鼠肠道黏膜氧化损伤的具有一定的保护作用,其作用机制可能与Nrf2-Keap1信号通路的激活有关。（2）提前灌胃火麻仁多糖对环磷酰胺致小鼠免疫抑制的具有一定的免疫调节作用,其作用机制可能与NF-κB通路的激活有关。（3）提前灌胃火麻仁多糖对环磷酰胺致小鼠肠道黏膜损伤有一定保护作用,可能与紧密连接蛋白和黏蛋白的表达量上调有关。（4）前期给予HSP0.2对H2O2诱导IPEC-1细胞氧化损伤具有预防保护作用,其作用机制可能与Keap1/Nrf2信号传导途径的激活有关。