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近年来的研究结果表明,肠道菌群的状态与人体健康水平息息相关,健康的肠道菌群不但对于维持消化系统自身的功能至关重要,也对全身各系统的正常运行具有重要作用[1]。膳食对于肠道菌群的状态具有重要影响,膳食中可溶性纤维的主要成分是多糖物质,这类生物大分子不易被肠道吸收入血[2],却是肠道菌群中的益生菌生存的重要营养和能量物质,故被称为益生元[3]。天然产物中的多种多糖可以作为益生元而肠道菌群。有效地利用多糖益生元可以为各种疾病的预防和治疗提供新的途径[4]。多糖益生元广泛存在于动物、植物、微生物中,到目前为止,从不同来源的生物中提取的多糖已被广泛用于开发功能性食用甚至药用。天然产物中的多糖作为益生元物质,对于肠道菌群具有促进其生长的功能[5]。然而,来源于不同生物体的多糖,其生物学功能也不尽相同。这些天然多糖具有广谱的生物学效应,如抗肿瘤、抗癌、抗菌、抗氧化、免疫调节等[6,7]。不同来源的多糖在相对分子质量和聚合物长度上差异很大,所含聚糖的种类和比例不同[8]。因此,阐明组成结构不同的多糖对菌群恢复的情况是否存在差异性具有重要的理论意义和应用价值。本研究所要解决的科学问题,是肠道各种益生菌在利用不同的多糖时是否具有偏好,某种多糖对益生菌的影响是否会进一步改变肠道菌群的结构,甚至影响宿主肠粘膜的状态。随着越来越多的多糖益生元被发现,人们对于其结构与功能之间的关系产生了更多的关注。因此,如果能够将具有特定结构的膳食多糖,与特定肠道细菌建立联系,将有助于针对病人的特定肠道菌群类型,进行精准干预,产生最佳效果。为了验证这一猜想,我们选择了三种不同来源的多糖:来自于海藻的褐藻胶多糖(WP),来自于真菌的茶树菇多糖(ACP),和来自于植物的茯苓多糖(PCP)。采用经典的抗生素诱导菌群失衡模型,探索该三种多糖对于小鼠肠道菌群影响的差异,初步建立多糖影响肠道菌群的构效关系。目的:确定三种多糖对小鼠肠道菌群紊乱具有调节作用,发现干预后肠道菌群改变的特点及其对肠道组织产生的病理学和免疫学影响,建立三种多糖与干预效果的联系。方法:1、采用水提法提取多糖,利用多糖可以溶解于浓度为60%-80%乙醇的原理浓缩多糖。2、将BALb/C小鼠随机分成五组,对照组(NC),自然恢复组(NR),褐藻胶多糖组(WP),茶树菇多糖组(ACP)和茯苓多糖组(PCP)。除对照组不做任何处理外,剩下四组均采用抗生素灌胃的方法制备肠道菌群失衡模型,每天用青霉素按照300mg/Kg剂量早晚灌胃5天,PCR-DGGE检测造模成功后,自然恢复组(NR)和对照组(NC)一样不做任何处理,三种多糖组分别灌胃相应多糖,剂量为每天100mg/Kg,灌胃10天后,将所有小鼠脱颈处死,分别取小鼠粪便、小肠定植菌群和小肠组织用于后续研究。3、小鼠粪便和小肠定植菌群进行提取DNA,一部分进行PCR-DGGE检测不同组别过路菌群和定植菌群变化,找到特异性条带并进行切胶纯化测序操作,一部分DNA进行16s r RNA测序作为验证(生物屏障)。小肠组织进行H&E染色、WB检测紧密连接蛋白表达(机械屏障),IHC染色检测MUC2表达(化学屏障),QPCR检测肠胞壁免疫因子IL-6,IL-10表达(免疫屏障)。结果:1、抗生素处理后PCR-DGGE(Deanturing Gradient Gel Electrophoresis)检测到抗生素处理组与对照组相比较,多样性和丰富度均明显下降,确定肠道菌群失衡模型造模成功。2、三种多糖均上调了小肠MUC2的表达,促进了小肠黏膜屏障的恢复,紧密连接蛋白Occludin和Zo-1表达也均呈现上调趋势。免疫因子IL-6、IL-10表达量也增加。3、变性梯度凝胶DGGE显示三种多糖对菌群失衡小鼠的肠道菌群恢复存在差异性,三种多糖均不同程度地提高了小鼠肠道菌群的丰富度。过路菌的PCR-DGGE图谱对比发现,WP组Blautia(布劳特菌)丰富度增加,ACP组的Parabacteroides(副杆菌)丰富度增加,PCP组的Alistipes(另枝杆菌)丰富度增加。定植菌群的PCR-DGGE图谱对比发现,三种多糖组(lactobacillus)乳酸杆菌属丰富度增加,Klebsiella(克雷伯菌)丰富度明显降低。16s r RNA高通量测序结果显示,三种多糖组布劳特菌属(Lac-Blautia)丰富度均增加,PCP组最为显著;WP组副杆菌属(Por-parabactoides)丰富度增加,PCP组Ver-Akkermansia丰富度有着明显的增加。结论:1、三种多糖均发挥了益生元的作用,提高了肠道菌群的丰富度,促进了肠道屏障的恢复。对益生菌具有促进作用,抑制了有害菌的繁殖。2、褐藻胶多糖对于有益菌副杆菌属(Parabactoides)有促进作用;茶树菇多糖对于有益菌拟杆菌属(Bacteriorides)有促进作用;茯苓多糖对有益菌Ver-Akkermansia有促进作用。