基于TLRs/NF-κB信号转导通路研究车前草治疗急性痛风性关节炎的实验研究

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目的:通过关节腔注射尿酸钠(MSU)建立急性痛风性关节炎(GA)的大鼠模型,探究中药车前草干预GA大鼠对TLRs/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响和作用机制,验证GA的炎症反应与TLRs/NF-κB信号转导通路的关系。方法:60只雄性SD大鼠随机分为6组,即对照组(CG)、模型组(MG)、秋水仙碱组、车前草低剂量组、车前草中剂量组、车前草高剂量组,每组10只。秋水仙碱组按0.3mg/kg秋水仙碱药液3 ml灌胃,车前草低、中、高组大鼠分别按照车前草100 mg/kg、300 mg/kg、500 mg/kg药液3 ml灌胃,CG、MG两组使用生理盐水3 ml进行灌胃。第6天灌胃结束后,取MG、秋水仙碱组、车前草低剂量组、车前草中剂量组、车前草高剂量组共50只大鼠采用MSU刺激作GA动物模型,CG则使用生理盐水注射关节腔。实验前测定各组大鼠踝关节肿胀度,GA模型构建成功后,分别测定6 h、12 h、24 h、48 h大鼠步态评分和踝关节肿胀情况;实验结束后,在麻醉下取大鼠腹主动脉血液6 ml,测定血清尿酸水平,ELISA检测各组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平;对大鼠踝关节切片进行组织病理学观察;Western blot检测滑膜组织中TLRs/NF-κB信号转导通路相关蛋白TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β的表达情况。结果:1.大鼠步态评分六组大鼠造模前步态评分无差异(P>0.05)。造模后,与空白组相比:模型组、车前草低剂量组和中剂量组在6 h、12 h、24 h、48 h步态评分差异均有统计学意义(P<0.05);秋水仙碱组和车前草高剂量组在6 h、12 h步态评分有差异(P<0.05),在24 h、48 h步态评分无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比:秋水仙碱组、车前草三组在6 h、12 h、24 h、48 h步态评分差异均有统计学意义(P<0.05)。与秋水仙碱组相比:车前草低剂量组和中剂量组在6 h、12 h、24 h、48 h步态评分有差异(P<0.05);车前草高剂量组在6 h、12 h、24 h、48 h步态评分不具有统计学意义(P>0.05)。2.大鼠踝关节周径变化六组大鼠造模前踝关节周径无差异(P>0.05)。造模后,与空白组相比:模型组、车前草低剂量组和中剂量组在6 h、12 h、24 h、48 h踝关节周径差异均有统计学意义(P<0.05);秋水仙碱组和车前草高剂量组在6 h、12 h踝关节周径有差异(P<0.05),在24 h、48 h踝关节周径无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比:秋水仙碱组、车前草三组在6 h、12 h、24 h、48 h踝关节周径差异均有统计学意义(P<0.05);与秋水仙碱组相比:车前草低剂量组和中剂量组踝关节周径在6 h、12 h、24 h、48 h有差异(P<0.05);车前草高剂量组踝关节周径在6 h、12 h、24 h、48 h不具有统计学意义(P>0.05)。3.大鼠血清尿酸水平分析实验结束后,与空白组相比:模型组、车前草低剂量组和中剂量组有差异(P<0.05);秋水仙碱组和车前草高剂量组血清中尿酸差异不具有统计学意义(P>0.05)。与模型组相比:秋水仙碱组、车前草剂量组血清中尿酸差异具有统计学意义(P>0.05)。与秋水仙碱组相比:车前草低剂量组和中剂量组血清中尿酸水平有差异(P<0.05);车前草高剂量组血清中尿酸水平不具有统计学意义(P>0.05)。4.HE染色结果光镜下可见:空白组滑膜细胞排列规整;模型组滑膜增生严重,含有大量的炎性细胞;秋水仙碱组少许滑膜增生,少量炎性细胞;车前草组随着浓度增高,炎性细胞减少。5.ELISA法检测血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的水平与空白组相比:模型组、车前草低剂量组和中剂量组有差异(P<0.05);秋水仙碱组和车前草高剂量组血清中TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度差异不具有统计学意义(P>0.05)。与模型组相比:秋水仙碱组和车前草剂量组血清中TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度差异具有统计学意义(P<0.05)。与秋水仙碱组相比:车前草低剂量组和中剂量组血清中TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度有差异(P<0.05);车前草高剂量组血清中TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度不具有统计学意义(P>0.05)。6.Western-Blot检测滑膜组织中TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β蛋白含量比较与空白组相比:模型组、车前草低剂量组和中剂量组有差异(P<0.05);秋水仙碱组组和车前草高剂量组滑膜组织中TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β蛋白表达差异不具有统计学意义(P>0.05)。与模型组相比:秋水仙碱组、车前草剂量组滑膜组织中TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β蛋白表达差异具有统计学意义(P<0.05)。与秋水仙碱组相比:车前草低剂量组和中剂量组滑膜组织中TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β蛋白表达有差异(P<0.05);车前草高剂量组滑膜组织中TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β蛋白表达不具有统计学意义(P>0.05)。结论:车前草能够改善GA模型大鼠踝关节滑膜组织的病理变化,抑制TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β蛋白的表达,有效的缓解了GA模型大鼠的进展。其作用机制可能是通过TLRs/NF-κB信号通路来抑制IL-1β、IL-6和TNF-α水平的升高,从而抑制炎性因子的升高。
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