miR-193a-3p、miR-200a-3p、miR-141-3p对大鼠H9C2心肌细胞中TGF-β2基因表达的影响

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目的转化生长因子β(TGF-β)信号通路在心血管系统发育中具有重要作用。microRNA(miRNA)可通过与靶基因mRNA的3’端非编码区(3’-UTR)互补结合,负性调节靶mRNA的表达,参与基因转录后调控。miRNA通过调控TGF-β信号通路在心脏发育及心血管疾病中的作用尚不明确,本研究旨在探讨miR-193a-3p、miR-200a-3p、miR-141-3p对大鼠H9C2心肌细胞中TGF-β2表达的影响。方法1.生物信息学方法预测与TGF-β2基因可能存在靶向关系的miRNA。2.构建野生型和突变型TGF-β2基因3’-UTR载体,分别与miR-193a-3p mimics、miR-200a-3p mimics、miR-141-3p mimics共转染,采用双荧光素酶报告基因检测荧光素酶活性。3.miR-193a-3p mimics、miR-200a-3p mimics、miR-141-3p mimics分别转染至大鼠H9C2心肌细胞,RT-PCR检测转染效率及对TGF-β2 mRNA表达的影响,Western blot检测对TGF-β2蛋白表达的影响。结果1.生物信息学方法预测发现,TGF-β2基因可能与miR-193a-3p、miR-200a-3p、miR-141-3p存在靶向关系。2.miR-193a-3p mimics能够使野生型TGF-β23’-UTR的荧光素酶活性降低,对突变型TGF-β2 3’-UTR的荧光素酶活性无明显影响;miR-200a-3p mimics、miR-141-3p mimics对野生型TGF-β2 3’-UTR和突变型TGF-β2 3’-UTR的荧光素酶活性均无明显影响。3.转染miR-193a-3p mimics、miR-200a-3p mimics、miR-141-3p mimics组相应miRNA表达水平明显增加,TGF-β2mRNA和蛋白表达水平下降。结论1.miR-193a-3p靶向负调控大鼠H9C2细胞中TGF-β2基因的表达。2.miR-200a-3p、miR-141-3p负调控大鼠H9C2细胞中TGF-β2基因的表达。
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