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目的骨肉瘤(Osteosarcoma)是一种原发恶性骨肿瘤,一般起源于骨组织细胞,病理生理改变为肿瘤细胞大量增殖形成骨样组织或未成熟骨等。骨肉瘤是种发病率较高的恶性肿瘤,尤其好发于儿童和青少年,严重摧残身心健康,其发病率约占原发性骨恶性肿瘤20%,并且转移早,恶性程度高,具有较高的致残、致死率,引起国内外广泛重视。骨肉瘤在骨骼血运丰富的部位易好发,例如长骨干骺端,其他部位偶有发生,其血行转移发生率高,转移早,进展较快。随着近些年来对骨肉瘤的治疗的方法有了重大进步,尤其是化疗的快速发展明显降低了癌外器官转移率,其5年总生存率也大大提高,患者的生活质量得到了一定提高,但是目前临床上多用甲氨蝶呤、多柔比星、顺铂等药物来治疗骨肉瘤,在这些药物化疗后部分患者预后仍然不佳,甚至出现耐药,即使与其他治疗方案如手术和放疗联合使用也很难改善预后和提高生活质量,另一方面,在大剂量使用化疗药物的同时,也产生了严重的毒副反应,产生二重伤害,给患者带来巨大的身心痛苦。除了传统外科手术和放化疗,从近些年研究来看,基因治疗、热疗、自噬治疗等新型治疗方式,均取得了一定进展,这些治疗的迅速发展可能会进一步提高患者生存率。目前来看,基因治疗是目前肿瘤治疗的热点之一,有望在根源上治愈和预防肿瘤。本研究目的在于探究YAP(yes相关蛋白)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响。方法用含10%胎牛血清的改良杜氏伊格尔(DMEM)/高糖培养基培养人骨肉瘤细胞系U2OS和MG63。通过基因公司构建人sh RNA-YAP(发卡RNA)质粒、pc DNA Flag YAP质粒、sh NC质粒和p EX-1质粒,分为四组,沉默YAP组:sh RNA-YAP质粒组,YAP过表达组:pc DNA Flag YAP质粒组,对照组:sh NC质粒组,对照组:p EX-1质粒组,采用Western blot技术分别检测在转染各组质粒后骨肉瘤细胞系U2OS和MG63中YAP的表达水平,以转染空质粒和空载体组作为对照。采用MTT试验检测各组骨肉瘤细胞的增殖能力,采用Transwell迁移试验和侵袭试验检测各组骨肉瘤细胞迁移能力和侵袭能力,采用流式凋亡试剂盒检测各组骨肉瘤细胞凋亡情况。结果给人骨肉瘤细胞系U2OS和MG63转染构建的质粒后,Western blot技术结果显示,现对于对照组,转染pc DNA Flag YAP质粒实验组YAP表达明显升高,转染sh RNA-YAP质粒实验组YAP表达明显降低,这种差异有统计学意义(P<0.05),说明转染成功。MTT试验结果显示,相对于空载体空质粒对照组,转染pc DNA Flag YAP质粒的MG63和U2OS细胞增殖能力明显增强,而转染sh RNA-YAP质粒的MG63和U2OS细胞增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell迁移试验和侵袭试验结果表明,相对于空载体空质粒对照组,转染pc DNA Flag YAP质粒的MG63和U2OS细胞迁移能力、侵袭能力明显增强,而转染sh RNA-YAP质粒的MG63和U2OS细胞迁移能力、侵袭能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。流式凋亡细胞术结果显示,相对于空载体空质粒对照组,转染pc DNA Flag YAP质粒的MG63和U2OS细胞凋亡率明显降低,而转染sh RNA-YAP质粒的MG63和U2OS细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过转染sh RNA-YAP质粒和pc DNA Flag YAP质粒,分别达到沉默YAP和过表达YAP的目的,转染后然后再通过MTT实验、Transwell迁移试验、侵袭试验和流式凋亡细胞实验结果表明,YAP通过某种方式使得骨肉瘤细胞U2OS和MG63的增殖、迁移、侵袭能力增强,减弱了其凋亡。本研究表明YAP可以作为骨肉瘤早期诊断和治疗的潜在靶点,为进一步研究YAP在骨肉瘤发病机制中的作用奠定了基础。