目的:本论文是在传统中医药理论指导下,以名优中成药玉屏风颗粒为研究对象,在原有质量标准基础上,根据中药新药质量控制研究技术要求,综合采用现代分析技术与方法,开展原料药材质量控制研究,并建立玉屏风颗粒中间体和成品的综合质量控制方法,通过建立原料药材、中间体、成品控制的关联性指纹图谱,实现对药物生产节点监控,为更好地控制产品的质量,保证制剂临床疗效的安全性和稳定性奠定技术基础。方法:1.原料药材质量控制研究(1)原料药材收集。收集不同产地、不同批次的玉屏风颗粒处方中黄芪、炒白术、防风3味原料药材。(2)原料药材鉴别与检验。按照2015年版《中国药典》一部各味药项下的相关要求对已收集的原料药材进行鉴别检验,将检验合格后的样品进行纳入后续研究。(3)原料药材指纹图谱研究。采用高效液相色谱(HPLC)法对不同的产地、不同批次的原料药材进行研究,分别对不同色谱条件和样品制备方法进行优选,并完成方法学考察,建立原料药材的HPLC指纹图谱,并采用国家药典委员会指纹图谱相似度软件进行相似度评价。(4)原料药材中的黄芪基源鉴别。采用DNA条形码分子生物学鉴定技术进行黄芪的基原鉴别。(5)采用GC-MS法建立防风挥发油指纹图谱,通过数据库比对指认相关成分。2.玉屏风颗粒中间体质量控制研究(1)指纹图谱建立。采用UPLC-PDA法、UPLC-ELSD法建立玉屏风颗粒中间体指纹图谱,并对所建立的方法进行方法学考察。运用相似度评价软件系统对指纹图谱进行分析,并通过与各味药材、对照品的比对,对已确定的共有色谱峰进行成分指认。(2)含量测定。根据玉屏风颗粒的制备工艺路线及相关活性成分,研究建立多种成分的UPLC-PDA、UPLC-ELSD含量测定方法。3.玉屏风颗粒成品质量控制研究(1)指纹图谱建立。采用UPLC-PDA法、UPLC-ELSD及TLC法建立玉屏风颗粒成品指纹图谱,运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004年版)进行指纹图谱分析,并通过与对照品色谱峰的比对,确定成分指认,对确定的共有峰进行成分指认及归属。(2)含量测定。根据玉屏风颗粒的制备工艺路线及相关活性成分,研究建立多种成分的UPLC-PDA、UPLC-ELSD含量测定方法。结果:1.原料药材质量控制研究(1)共收集了黄芪药材48批、白术药材45批、防风药材40批,经检验,符合现行版《中国药典》规定的分别有45批、41批、40批,合格率分别为93.75%、88.89%、100%。(2)分别建立了玉屏风颗粒原料药材(黄芪、炒白术、防风)HPLC指纹图谱,所建立的HPLC指纹图谱中各共有色谱峰分离度均较高,具有较强的专属性其中所建立的防风HPLC指纹图谱,可快速、准确地鉴别其正品防风与伪品水防风药材。(3)选取psbA-trnH序列作为黄芪DNA条形码,通过与中药材DNA条形码鉴定系统比对,成功区分蒙古黄芪和膜荚黄芪。(4)建立了防风挥发油GC-MS指纹图谱,并对相关成分进行指认,对防风药材进行了质量控制。2.玉屏风颗粒中间体质量标准研究(1)建立了玉屏风颗粒中间体UPLC-PDA指纹图谱,确定了 15个共有特征峰,通过与混合对照品图谱对比,指认了 9个色谱峰,分别为2#升麻素苷、3#毛蕊异黄酮葡萄糖苷、4#升麻素、5#5-O-甲基维斯8米醇苷、6#芒柄花苷、9#毛蕊异黄酮、10#亥茅酚苷、12#芒柄花素、15#白术内酯Ⅲ。10批玉屏风颗粒中间体样品UPLC指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在0.9以上。(2)建立了玉屏风颗粒中间体UPLC-ELSD指纹图谱。确定了 18个共有色谱特征峰,通过与混合对照品比对,指认了 10个色谱峰,分别为1#升麻素苷、2#毛蕊异黄酮葡萄糖苷、3#升麻素、4#5-O-甲基维斯阿米醇苷、9#毛蕊异黄酮、10#黄芪甲苷、13#黄芪皂苷Ⅱ、14#异黄芪皂苷Ⅱ、16#黄芪皂苷Ⅰ、17#异黄芪皂苷Ⅰ。10批玉屏风颗粒中间体样品UPLC-ELSD指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在0.9以上。(3)建立了方中14个成分的含量测定方法。分别建立了升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、亥茅酚苷、芒柄花素、白术内酯Ⅲ等9种成分的UPLC-PDA含量测定方法与黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ及异黄芪皂苷Ⅰ等5种成分的UPLC-ELSD含量测定方法。3.玉屏风颗粒成品质量控制研究(1)建立了成品TLC特征指纹图谱。在薄层色谱中,指认出毛蕊异黄酮、升麻素、芒柄花苷、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅱ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5-0-甲基维斯阿米醇苷、升麻素苷、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷共12种成分。此方法可直观快速的鉴别玉屏风颗粒相关成分。(2)建立了玉屏风颗粒成品UPLC-PAD指纹图谱,确定了 16个共有特征峰,通过与混合对照品图谱对比,指认了 9个色谱峰,分别为2#升麻素苷、3#毛蕊异黄酮葡萄糖苷、4#升麻素、5#5-0-甲基维斯阿米醇苷、6#芒柄花苷、9#毛蕊异黄酮、10#亥茅酚苷、13#芒柄花素、16#白术内酯Ⅲ。10批玉屏风颗粒成品样品UPLC指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在0.9以上。(3)建立了玉屏风颗粒成品UPLC-ELSD指纹图谱。确定了25个共有色谱特征峰,通过与混合对照品比对,指认了10个色谱峰,分别为1#升麻素苷、2#毛蕊异黄酮葡萄糖苷、3#升麻素、4#5-0-甲基维斯阿米醇苷、9#毛蕊异黄酮、17#黄芪甲苷、20#黄芪皂苷Ⅱ、21#异黄芪皂苷Ⅱ、23#黄芪皂苷Ⅰ、24#异黄芪皂苷Ⅰ。10批玉屏风颗粒成品样品UPLC-ELSD指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在0.9以上。(4)建立了方中14个成分的含量测定方法。分别建立了升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、亥茅酚苷、芒柄花素、白术内酯Ⅲ等9种成分的UPLC-PDA含量测定方法与黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ及异黄芪皂苷Ⅰ等5种成分的UPLC-ELSD含量测定方法。结论:本论文通过建立名优中成药玉屏风颗粒“原料药材——中间体——成品”的关联性指纹图谱,提升了产品质量控制标准,实现了对药物生产节点监控,为确保临床用药的安全性和有效性奠定了基础。