舌癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,占口腔颌面部恶性肿瘤的45.9%。舌癌病因至今不明,普遍认为是“癌瘤病因综合作用的”结果。因此,研究舌癌发生发展的机制及治疗方法具有重要意义。随着近年来分子生物学研究的进展,国内外学者认为舌癌的发生是一个由多个基因和细胞因子参与介导的过程,近年研究发现骨形成蛋白及其信号通路在舌癌的发生及发展中发挥重要的作用。骨形成蛋白2(Bone morphogenetic protein-2, BMP-2)是调节骨形成的重要的因子,它在骨骼的胚胎发育、再生修复中起着重要作用。近年研究发现,BMP-2影响不同恶性肿瘤细胞增殖、形成和转移,具有调节恶性肿瘤的生物学行为的作用。Noggin基因对体内骨骼、神经等多个系统的发育和／或重塑起着重要的调控作用。Noggin蛋白是一种BMP-2的细胞外拮抗剂,它可以与BMP-2特异性地结合,阻止BMP-2与其细胞表面的受体结合,从而抑制BMP-2生物学功能的发挥。Noggin和BMP-2的相互调节在多种疾病的发生、发展过程中具有重要作用,通过调节Noggin和BMP-2的相互作用治疗相关疾病,成为现在研究的一个方向。本课题旨在研究外源性BMP-2、BMP-2/Noggin相互作用对舌癌细胞的增殖的影响,并探讨其可能的机制,从而为表达BMP-2肿瘤的临床治疗提供新的实验依据。目的研究外源性BMP-2及BMP-2/Noggin相互作用对舌癌细胞增殖的影响及BMP/Smad信号转导通路变化。方法1、舌癌细胞培养：‘体外培养舌癌细胞系Tca8113细胞,倒置显微镜观察细胞的形态及增殖活性。2、外源性BMP-2对舌癌细胞增殖活性及BMP/Smad信号通路的影响：用不同浓度的BMP-2蛋白(0,20,40,60,80,100ng/ml)作用于体外培养的舌癌细胞,利用倒置显微镜观察细胞生长和形态的变化情况,分别于培养后1,2,3,4,5,6d用甲基偶氮唑盐(MTT)法检测BMP-2对舌癌细胞增殖活性的影响以及其与剂量和时间的关系。Western blot分别检测2d,4d时不同BMP-2浓度(40,80ng/ml)下BMPRⅡ、Smad4蛋白的变化。3、Noggin蛋白对舌癌细胞增殖活性及BMP/Smad信号通路的影响：将传代后细胞加入含40ng/mlBMP-2的培养液中,细胞贴壁24h后,分别加入Noggin蛋白,使培养液的Noggin蛋白浓度分别为0,100,200,300,400,500ng/ml,分别于培养后1,2,3,4,5,6d用MTT法检测Noggin和BMP-2的相互作用对舌癌细胞增殖活性的影响。Western Blot分别检测2d,4d不同Noggin蛋白浓度(200,400ng/ml)下BMPRⅡ、Smad4蛋白的变化。结果1、舌癌细胞培养：舌癌细胞Tca8113细胞生长良好,单个细胞呈三角形或长梭形,立体感不强。集落性生长,增殖较快,约第2天开始进入对数生长期,第4天进入平台期。2、外源性BMP-2对舌癌细胞增殖活性及BMP/Smad信号通路的影响：BMP-2蛋白抑制舌癌细胞的增殖,随浓度增加抑制作用逐渐增强,80ng/ml时抑制作用较强,100ng/ml时趋于稳定。随BMP-2蛋白浓度和时间的增加,BMPRⅡ、Smad4蛋白的表达逐渐增强。3、Noggin蛋白对舌癌细胞增殖活性及BMP/Smad信号通路的影响：Noggin蛋白促进舌癌细胞的增殖,随浓度增加促进作用逐渐增强,400ng/ml时促进作用较强,500ng/ml时趋于稳定。随Noggin蛋白浓度和时间的增加,BMPRⅡ、Smad4蛋白的表达逐渐减弱。结论1、MTT检测显示外源性BMP-2蛋白抑制舌癌细胞的增殖,此抑制作用有时间和剂量依赖性,通过Western Blot检测发现BMP-2对舌癌细胞抑制作用越强,BMP/Smad信号转导通路表达也越强。说明BMP-2可能通过BMP/Smad信号转导通路调控舌癌细胞的增殖。2、通过MTT检测发现BMP-2蛋白拮抗剂Noggin蛋白可促进舌癌细胞的增殖,其机制可能是Noggin拮抗BMP-2蛋白的功能,从而影响其抑制舌癌细胞增殖作用的发挥。Western Blot检测发现Noggin蛋白浓度越高,BMP/Smad信号转导通路的表达越弱。进一步说明BMP-2可能是通过BMP/Smad信号转导通路发挥抑制舌癌细胞增殖的作用。