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[目的] 探讨用致敏肥大细胞的组胺释放率鉴定与评价食品过敏原的方法;建立能同时检测多种食品过敏原的dot-ELISA诊断技术。 [方法] 以虾、花生和鸡蛋清蛋白浸液作为致敏原,氢氧化铝为佐剂免疫BALB/c小鼠,建立IgE高反应性食物过敏动物模型。间接ELISA测定血清中特异性IgE(slgE);分离小鼠腹腔肥大细胞,过敏原体外激发,电镜观察过敏原刺激前、后肥大细胞形态学变化,荧光法检测肥大细胞的组胺定向释放率。Western blot分析过敏原浸液中主要的过敏性组分,并用阴离子交换层析将其分离纯化。dot-ELISA检测过敏原sIgE,并探索其最佳反应条件。 [结果] 模型组小鼠血清sIgE和肥大细胞组胺释放率均比对照组明显升高,提示过敏模型复制成功。过敏原激发后第14d slgE效价最高,虾、花生和鸡蛋清蛋白组分别达到1/6400,1/6400和1/3200;鸡蛋清蛋白组肥大细胞的组胺释放率达60.75%,河虾组腹腔或皮下免疫分别达到71.53%和88.48%。电镜观察显示,脱颗粒肥大细胞胞浆出现很多空泡,致密性颗粒减少。Western blot鉴定显示蛋清中主要过敏性组分为OVA,相对分子量40kD;虾中主要过敏性组分为Pen m2,相对分子量36kD。初步建立了能同时检测多种过敏原的dot-ELISA实验方案,dot-ELISA中各种过敏原最适包被量为2μL(10μg蛋白),待检抗血清最佳稀释度为1:80,通过观察NC膜上的斑点即可确定待检血清中的sIgE类型,且三种过敏原之间无交叉反应性。不同时间同批试剂重复检测结果完全一致,包被过敏原的NC膜4℃可稳定保存3个月。 [结论] 通过建立小鼠过敏模型,检测致敏肥大细胞的组胺释放率可能成为食品过敏原鉴定与评价的新方法。dot-ELISA可同时检测多种过敏原sIgE,该法简便、特异、稳定、重复性好,以期用于临床过敏症的诊断。