知母是百合科植物知母（Anemarrhena asphodeloides Bge.）的干燥根茎，为中国药典收载的常用中药之一，味甘、苦，性寒，入肺、胃、肾经，具有清热泻火、生津润燥之功效。其化学成分主要有甾体皂苷、双苯吡酮类、木脂素类、有机酸类、生物碱、黄酮类、多糖类、微量元素及大量的黏液质等。具有抗炎、抗菌及镇痛解热作用以及抗衰老、抗血小板聚集、降血糖作用。目前知母及其复方制剂已广泛的用于临床。本文采用LC-MS作为主要分析方法，利用其快速高效、灵敏度高、特异性强的特点，对知母中的化合物进行定量分析，并利用化学计量学的方法对其质量进行有效合理的控制。同时研究了知母贝母复方制剂（二母制剂）的6种成分在动物体内的药代动力学过程和排泄规律，为进一步合理使用中药复方提供理论基础。第一部分HPLC-MS法结合化学计量学分析测定知母中的9种成分目的：建立一种快速、准确、可同时测定知母中9种化学成分（4种甾体皂苷成分、2种双苯吡酮、2种异黄酮及1个蒽醌类化合物）的HPLC-ESI-MS分析方法，并采用化学计量学分析对不同来源知母与知母的不同部位的质量进行有效合理的分析。方法：取知母药材粉末约1.0g，精密称定，加入30mL乙醇，密塞，称定重量，超声处理60min，放冷，称重，用乙醇补足至原重量后，摇匀，过滤（0.45m微孔滤膜），取续滤液，10μL进样后测定。含量测定方法的建立在MRM正负离子扫描模式下进行，并对30批不同来源的知母和知母不同部位进行测定分析，聚类分析和主成分分析对30批样品的含量测定结果进行区分和分类。质谱色谱条件：电喷雾离子源（ESI）；正负离子在同一周期内进行转换同时监测；源喷射电压（正离子）5500V；（负离子）-4500V。离子源温度：600℃。雾化气（Gas1）：40psi，加热气（Gas2）：50psi，帘气：25psi。色谱条件：色谱柱： Diamonsil C18column（250mm×4.6mm，5μm）；柱温：30℃；洗脱程序：0-2.5min，流动相乙腈-0.1%甲酸水(5:95, v/v)线性变至乙腈-0.1%甲酸水(55:45, v/v)；2.5-5min，流动相乙腈-0.1%甲酸水(55:45, v/v)线性变至为乙腈-0.1%甲酸水(95:5, v/v)；5-20min，乙腈-0.1%甲酸水(95:5,v/v)下等度洗脱；最后流动相的比例迅速转变为最初的乙腈-0.1%甲酸水(5:95, v/v)。每次进样前要预平衡6min，再进行梯度洗脱。运行时间：20min；流速：800μL/min，进样量10μL。结果：在一定浓度区间内9种活性成分的线性关系良好，r~2>0.9912；日内和日间精密度分别小于2.21%和2.34%；平均回收率96.8%~103.9%，RSD0.81to2.32%；样品储存于4℃，48h内稳定性良好(RSD <2.28%)。30批样品含量采用上述HPLC-ESI-MS方法测得。同一周期内通过转换正负离子源20min内可完成一次分析。MRM正负离子扫描模式降低了噪音水平，提高了分析的灵敏度。30批样品总含量范围为23.01到132.65mg/g，含量差异较大。HB-4，HB-5和HB-6含量最高(132.65,120.59, and116.92mg/g)；而HBL-1, HBL-2和HBL-3含量最低(23.01,34.09, and29.68mg/g)。30批样品总含量平均值90.46mg/g。6批样品（HBP-1,-2,-3andHBS-1,-2,-3）略低于平均总含量，HBL-1,-2,-3总含量最低。知母皂苷BII是样品中含量最高的活性成分43.79mg/g，其次是芒果苷36.13mg/g。主成分分析及聚类分析对30批知母药材成功分类区分，证明了道地药材质量最佳。知母地上地下部分均含有活性成分，并且含量较高，也应得到充分的开发利用。结论：该方法简便快速，灵敏度高，选择性好，为知母药材的质量控制提供了新的方法和手段。第二部分HPLC-MS法同时测定大鼠口服知母、贝母与复方提取物后血浆中6种成分及其药动学比较目的：二母制剂，用于治疗哮喘和支气管炎症的传统中药复方制剂，最早记载于我国古代的《景岳全书》和《急救仙方》等著名方剂学中医古籍中。该制剂不仅在中国有悠久的历史，在东方国家如韩国也被广泛使用治疗咳嗽和哮喘。二母制剂由知母和贝母两种药材等比例组合后提取制备。新芒果苷、芒果苷、贝母素甲、贝母素乙、知母皂苷BII和知母皂苷AⅢ是二母制剂中的主要活性成分。该研究建立一种基于多组分同时测定大鼠血浆中新芒果苷、芒果苷、贝母素甲、贝母素乙、知母皂苷BII和知母皂苷AⅢ含量的HPLC-MS方法，并用于大鼠灌胃给予知母、贝母单味药材提取物和知母、贝母混合提取物后该6种成分的药代动力学研究，建立其药-时曲线，阐明各自药动学参数与特征，并比较了单方与复方制剂的药动学差异，考察了配伍对活性成分药动学的影响。方法：知母（100g）、贝母（100g）粉碎后分别用70%乙醇按1:10,1:10,1:5的比例回流提取3次后浓缩至2g/mL的提取物。知母和贝母提取物按1：1比例混合后制成二母制剂。知母和贝母提取物中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、知母皂苷AⅢ、含量分别为8.76，21.16，74.24，4.16，0.32和0.57mg/mL。大鼠随机分为3组，分别灌胃给予单味知母或贝母提取物，知母、贝母混合提取物后，由眼眦静脉丛取血，取血时间为5,10,15,30,60,120,180,240,360,480,600,1440,2160和2880min。样品置于肝素化的试管内，离心得到上清液为血浆样品，采用沉淀蛋白法预处理样品，内标为磺胺甲噁唑。C18色谱柱，洗脱程序0-7.0min，流动相乙腈-0.1%甲酸水(5:95,v/v)线性变至乙腈-0.1%甲酸水(55:45, v/v)；7.0-10.0min，流动相乙腈-0.1%甲酸水(55:45, v/v)线性变至乙腈-0.1%甲酸水(95:5, v/v)；10.0-15.0min，乙腈-0.1%甲酸水(95:5,v/v)下等度洗脱；最后10.0-15.2min流动相的比例迅速转变为最初的乙腈-0.1%甲酸水(5:95, v/v)。每次进样前要预平衡6min，再进行梯度洗脱。流速：800μL/min，进样量10μL。离子源为电喷雾（ESI），正负离子多周期同时扫描，多反应模式监测（MRM）进行定量。监测分为3个阶段，0-6.19min在负离子模式监测新芒果苷和芒果苷；6.19-6.22min由负离子模式转换成正离子模式；之后在正离子模式下监测知母皂苷BII、知母皂苷AⅢ、贝母素甲、贝母素乙和内标。6种被测成分的监测离子对分别为新芒果苷m/z583.0/331.0，芒果苷m/z421.1/301.0，贝母素甲m/z432.5/414.5，贝母素乙m/z430.5/412.5，知母皂苷BII m/z903.1/417.2，知母皂苷AⅢ m/z741.4/417.3和磺胺甲噁唑m/z254.0/156.0。药动学数据采用非室模型处理，用excel软件分析数据。达峰时间(Tmax)和峰浓度(Cmax)由血药浓度曲线直接获得。消除常数（k）由曲线最后4个点的斜率的对数计算得到。消除半衰期T1/2=0.693/k。结果：血浆中新芒果苷、芒果苷、贝母素甲、贝母素乙、知母皂苷BII和知母皂苷AⅢ分别在4.63～1852.8、2.92～1168、3.56～1424、4.44～1776、4.40～1760和4.00～1600ng/mL范围内线性关系良好（r~2≥0.9946），最低定量限（LLOQ）≤2.27ng/mL。日内、日间精密度的相对标准偏差（RSD）均小于7.8%，相对误差（RE）为-7.4%～7.4%。平均提取回收率为80.6%～102.3%。大鼠灌胃知母或贝母单味提取物和混合提取物后新芒果苷、芒果苷、贝母素甲和贝母素乙的药动学参数有显著性差异(P<0.05)。与灌胃知母提取物相比，复方提取物大鼠的芒果苷和新芒果苷的Cmax和AUC均显著增加，T1/2有所下降，Tmax无显著性差异。灌胃知母和灌胃复方制剂后，知母皂苷BII和知母皂苷AⅢ的药动学参数没有显著性差异。与灌胃贝母提取物相比，灌胃复方提取物大鼠的贝母素甲和贝母素乙的Cmax和AUC都显著增加，T1/2明显延长，Tmax无显著性差异。结论：该法灵敏度高、选择性好、精密度好，节约时间和试剂，可用于大鼠灌胃提取物后血浆中新芒果苷、芒果苷、贝母素甲、贝母素乙、知母皂苷BII和知母皂苷AⅢ的药动学研究。根据药动学结果由此可推断二者配伍可影响活性成分的药动学特征，并可以初步推断知母和贝母配伍的合理性。第三部分HPLC-MS法同时测定大鼠口服知母、贝母与复方提取物后胆汁和尿液中6种成分及其在胆汁和尿液中的排泄动力学目的：二母制剂，用于治疗哮喘和支气管炎症的传统中药复方制剂，最早记载于我国古代的《景岳全书》和《急救仙方》等著名方剂学中医古籍中。该制剂不仅在中国有悠久的历史，在东方国家如韩国也被广泛使用治疗咳嗽和哮喘。二母制剂由知母和贝母两种药材等比例组合后提取制备。新芒果苷、芒果苷、贝母素甲、贝母素乙、知母皂苷BII和知母皂苷AⅢ是二母制剂中的主要活性成分。本研究建立一种可同时测定大鼠胆汁和尿液中6种成分——新芒果苷、芒果苷、贝母素甲、贝母素乙、知母皂苷BII和知母皂苷AⅢ含量的HPLC-MS方法，并用于大鼠灌胃给予单味知母或贝母药材提取物和二母混合药材提取物后，该6种成分的胆汁和尿液排泄动力学研究。通过比较口服不同提取物后的排泄动力学参数，考察其配伍对活性成分的排泄动力学参数的影响。方法：健康SD雄性大鼠18只，随机分为3组，每组6只，大鼠分别灌胃给予单味知母或贝母药材提取物和知母贝母混合药材提取物，麻醉后行胆管切开术，分别在2,4,6,8,10,24,36和48h收集胆汁样品。另取SD大鼠18只，随机分为3组，每组6只，大鼠分别灌胃给予单味知母或贝母药材提取物和二母混合药材提取物，收集0–4,4–8,8–12,12–24,24–36,36–48,48–60和60–72h尿液。采用直接进样的方法进行样品前处理，内标为SMZ。C18柱，洗脱程序0-7.0min，流动相乙腈-0.1%甲酸水(5:95, v/v)线性变至乙腈-0.1%甲酸水(55:45, v/v)；7.0-10.0min，流动相乙腈-0.1%甲酸水(55:45, v/v)线性变至为乙腈-0.1%甲酸水(95:5, v/v)；10.0-15.0min，乙腈-0.1%甲酸水(95:5,v/v)下等度洗脱；最后10.0-15.2min流动相的比例迅速转变为最初的乙腈-0.1%甲酸水(5:95, v/v)。每次进样前要预平衡6min，再进行梯度洗脱。流速：800μL/min，进样量10μL。离子源为电喷雾（ESI），正负离子多周期同时扫描，多反应模式监测（MRM）。监测分为3个阶段，0-6.19min在负离子模式监测新芒果苷和芒果苷；6.19-6.22min由负离子模式转换成正离子模式；之后在正离子模式下监测知母皂苷BII、知母皂苷AⅢ、贝母素甲、贝母素乙和内标。6种被测成分的监测离子对分别为新芒果苷m/z583.0/331.0，芒果苷m/z421.1/301.0，贝母素甲m/z432.5/414.5，贝母素乙m/z430.5/412.5，知母皂苷BII m/z903.1/417.2，知母皂苷A Ⅲ m/z741.4/417.3和磺胺甲噁唑m/z254.0/156.0。测定大鼠灌胃给予不同提取物后胆汁和尿液中6种化学成分累积排泄率。结果：结果表明，所测的6种活性成分仅有不足7%的原型从尿液中排出；不足5%的原型从胆汁排泄。灌胃知母贝母复方提取物和单方提取物后该6种成分表现出显著不同的排泄行为。灌胃复方提取物后6种化合物在尿液中的排泄水平均高于单方提取物的排泄水平（约4倍到14倍）。而在胆汁排泄中，灌胃复方提取物后只有芒果苷、贝母素甲和贝母素乙的排泄水平高于单方提取物，其余3种成分新芒果苷、知母皂苷BII和知母皂苷AⅢ的排泄水平均低于单方提取物。结论：经方法学考察符合生物样品的测定要求，可用于大鼠胆汁和尿液中6种成分浓度的测定及排泄研究。无论口服知母贝母复方提取物还是单方提取物待测的6种成分在体内都经过了广泛的代谢或生物转化。不同的代谢机制导致了不同的排泄行为。第四部分HPLC-MS法同时测定金莲清热颗粒中7种成分的含量目的：建立HPLC-MS法测定金莲清热颗粒中荭草苷，牡荆苷，金丝桃苷，新芒果苷，芒果苷，知母皂苷BⅡ和知母皂苷AⅢ含量的方法。方法：取金莲清热颗粒，研细，精密称定粉末0.500g，置锥形瓶中，精密加入乙腈50mL，称定质量，超声(功率:100W；频率:25kHz)处理1h，放冷，再称定质量，用乙腈补充所失的重量，摇匀，离心，0.45μm滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液，稀释20倍后进样10μL。质谱色谱条件：MRM正负离子扫描模式、电喷雾离子源（ESI）；正负离子在同一周期内进行转换同时监测；源喷射电压（正离子）5500V；（负离子）-4500V。离子源温度：600℃。雾化气（Gas1）：40psi，加热气（Gas2）：50psi，帘气：25psi。色谱柱：C18Diamonsil column（250mm×4.6mm，5μm）；柱温：30℃；洗脱程序：0-2.5min，流动相乙腈-0.1%甲酸水(5:95, v/v)线性变至乙腈-0.1%甲酸水(55:45, v/v)；2.5-5min，流动相乙腈-0.1%甲酸水(55:45, v/v)线性变至为乙腈-0.1%甲酸水(95:5, v/v)；5-20min，乙腈-0.1%甲酸水(95:5,v/v)下等度洗脱；最后流动相的比例迅速转变为最初的乙腈-0.1%甲酸水(5:95, v/v)。每次进样前要预平衡6min，再进行梯度洗脱。运行时间：20min；流速：800μL/min，进样量10μL。结果：在15min内金莲清热颗粒中7种主要成分峰面积与浓度呈良好的线性关系；加样回收率分别为99.34%,99.28%,101.6%,101.3%,100.5%,101.9%和98.86%(n=3)。RSD值分别为1.12%,1.36%,1.57%,1.74%,1.52%,1.43%和0.92%。结论：该方法简便，准确，重现性好，专属性高，可用于金莲清热颗粒的质量控制。第五部分HPLC-MS法同时测定知柏地黄丸中9种成分的含量目的：建立HPLC-MS法测定知柏地黄浓缩丸中新芒果苷，芒果苷，知母皂苷BⅡ，知母皂苷AⅢ，小檗碱，莫诺苷，马钱苷，芍药苷和丹皮酚含量的方法。方法：取知柏地黄丸适量，研细，精密称定粉末0.4133g，置锥形瓶中，精密加入50%乙腈50mL，称定质量，超声处理(功率:100W；频率:25kHz)0.5h，放冷，再称定质量，用50%乙腈补足减失的重量，摇匀，离心，0.45μm滤膜滤过，溶液稀释20倍后取10μL进样分析。采用Diamonsil C18柱(150mm×4.6mm,5μm)；柱温30℃；乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相以800μL/min梯度洗脱；质谱条件：采用电喷雾离子源正负离子模式同时进行检测，多反应监测模式(MRM)用于定量测定。结果：在15min内知柏地黄丸中9个有效成分峰面积与浓度线性关系良好；加样回收率(n=3)分别为97.4%，99.2%，100.3%，101.8%，99.5%，101.6%，99.6%，101.7%和98.86%。RSD值分别为1.2%，1.6%，1.0%，0.7%，1.5%，0.4%，1.0%，1.1%和0.9%。结论：该方法简便，准确，重现性好，专属性高，可用于知柏地黄丸的质量控制。