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背景和目的 肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)是肝纤维化发生过程中细胞外基质(extracellular matrix, ECM)形成的主要细胞，HSC的活化、增殖及凋亡受细胞内信号传导通路的调控，近年来，肝纤维化的发病机制与HSC信号传导一直是研究的热点。对酒精性肝病的研究已证明：乙醇的代谢产物—乙醛作为有效刺激信号是激活HSC导致肝纤维化发生的关键分子。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路参与调控细胞的增殖、分化与凋亡，是丝裂原激活蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase, MAPK)家族的重要成员之一。目前就JNK信号传导通路的激活与肝纤维化发生机制的研究报道较少，有研究显示JNK信号通路的活化与肝细胞的增殖、HSC内Ⅰ胶原及其相关基因的表达密切相关。我们前期研究证实MAPK家族中的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路是调控乙醛刺激HSC增殖的重要通道，但国内外尚未有关JNK与HSC的增殖及凋亡的研究报道。本实验旨在通过JNK特异性阻断剂SP600125作用于乙醛刺激的HSC后，观察HSC内JNK活性变化与细胞增殖、细胞凋亡的关系；初步探讨JNK信号传导通路调控HSC细胞增殖及凋亡的分子机制；以期为肝纤维化的发生和防治提供理论和实验依据。 方法 体外培养大鼠HSC株；采用Western blot、免疫组化法检测乙醛刺激后HSC内JNK活性的变化，和用不同剂量SP600125(20、60、100 ng／ml)对乙醛刺激HSC内JNK活性的影响；采用MTT比色法、流式细胞仪分别检测上述剂量的SP600125作用于乙醛刺激的HSC后细胞增殖及其细胞周期变化；DNA片段凝胶电泳及流式细胞仪分析SP600125对乙醛刺激后HSC的细胞凋亡的影响。 结果 (1)HSC被乙醛刺激后，磷酸化JNK(phosphorylated-JNK,p-JNK)水平增第三军医人学硕士研究生论文高，细胞由Gl~S期转化增多、促进细胞增殖。与空白对照组比较，统计学分析有显著差异(尸<0.05)。 (2)浓度为20、60、100 ng/ml的Sp600125均能抑制乙醛刺激的HSe内p一JNK水平，与对照组比较有显著差异(p<0.05):同时明显阻滞细胞由Gl一S期转化，进而抑制细胞增殖。 (3)DNA凝胶电泳图谱上可见中、高浓度组(60、1 00 ng/ml)呈典型的凋亡梯形带(DNA Ladder)，而空白对照组、乙醛组和低浓度组(Zong/ml)未见梯形条带;在流式细胞仪结果中:空白对照组及乙醛组中细胞凋亡率为2.肚0.2%和6.0士0.5%(两者有显著性差异P<0.05)，经sP600125处理后细胞凋亡率上升(分别为11.1土0.4%;26.9土0.9%;”.1士1.3%)，同乙醛组相比有显著性差异(P<0.05)，故sP600125具有促进HSe凋t的作用。结论 (1)乙醛刺激HSC后，引起JNK信号传导通路活化。 (2)乙醛促进HSC增殖与JNK活化呈正相关，并呈剂量依赖性。 (3)乙醛刺激HSC后，HSC凋t增加，用sP6ool25抑制JNK信号传导通路后凋亡率明显升高。提示SP600125通过阻断JNK通路，促进HSC凋亡，故JNK信号通路可能参与了HSC的凋亡的调控。