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研究背景与目的:卵巢癌的标准治疗以肿瘤细胞减灭术加铂类为基础的化疗为主,虽然大多数病人起初反应较好,但高达75%的患者会出现复发,并最终发展为铂化疗耐药。铂化疗耐药机制复杂多样,DNA损伤修复功能增强是其中一个重要原因。卵巢癌细胞增殖的机制之一是由细胞周期调控失调所驱动的持续的细胞生长。细胞分裂周期7（Cell division cycle 7,CDC7）是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,在调控DNA复制起始中起着关键作用,此外,还参与DNA损伤反应和复制应激,对维持基因组稳定性至关重要。CDC7激酶作为细胞周期上游信号调控通路的核心成分之一,有研究报道CDC7激酶与晚期卵巢癌患者预后差及化疗耐药有关。CDC7抑制剂被报道在很多肿瘤中具有抗肿瘤活性,而CDC7抑制剂XL413对卵巢癌是否有抗肿瘤活性及其与卵巢癌化疗敏感性的关系尚不清楚。因此,本研究探讨CDC7抑制剂XL413与卵巢癌常用化疗药卡铂联合应用对卵巢癌细胞的影响。研究方法:在体外探讨CDC7抑制剂XL413及其序贯联合卡铂（Carboplatin,CBP）对卵巢癌细胞的影响,同时挖掘联合治疗的潜在机制,并进一步在体内评估两药序贯联合对卵巢癌的疗效。（1）通过CCK8实验检测CDC7抑制剂XL413对卵巢癌细胞SKOV-3和OVCAR-3生长活力的影响;Western blot实验检测XL413处理细胞后总Mcm2和p-Mcm2（S40,S53）的蛋白水平变化;（2）通过CCK8实验检测CBP、XL413单药及二者不同序贯联合（CBP之后序贯联合XL413:CBP→XL413;XL413之后序贯联合CBP:XL413→CBP）对卵巢癌细胞SKOV-3和OVCAR-3的生长抑制作用;通过平板克隆形成实验及流式实验分别探讨CBP、XL413单药及CBP→XL413序贯联合对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响;（3）Western blot及免疫荧光实验分别检测SKOV-3和OVCAR-3细胞经过不同治疗后γH2AX和RAD51蛋白的表达水平变化及细胞内焦点分布情况,以探讨不同处理对DNA损伤和修复的影响;（4）构建裸鼠SKOV-3皮下瘤及和OVCAR-3腹腔转移瘤模型,治疗期间通过定期测量皮下瘤体积及活体成像监测腹腔肿瘤荧光信号分布,比较卡铂序贯联合XL413（CBP→XL413）与CBP、X413单药治疗的效果差异;通过免疫组化染色实验检测各治疗组中RAD51,γH2AX和Ki67表达水平;（5）为了观察XL413是否可以延迟卡铂治疗后肿瘤复发时间,我们通过平板克隆实验及OVCAR-3小鼠皮下瘤模型观察XL413撤药后对细胞生长的影响。结果:（1）CDC7抑制剂XL413抑制卵巢癌细胞SKOV-3和OVCAR-3的生长活力,呈剂量依赖性,IC50分别为32.02μM、23.29μM;取接近IC50和IC50/2的两个不同浓度,即25μM和10μM,处理SKOV-3与OVCAR-3细胞36 h,Western blot实验结果显示这两个浓度的XL413均可以明显抑制MCM2的磷酸化;我们用10μM XL413进行后续细胞水平的实验。（2）CCK8实验检测4组不同处理的细胞生长抑制率结果显示,CBP→XL413组细胞生长抑制率明显大于XL413和CBP各单药组及XL413→CBP组（P＜0.001）。平板克隆实验显示CBP→XL413组显著抑制克隆形成,与XL413和CBP单药组相比差异均有统计学意义（P＜0.001）;流式细胞分析结果显示CBP→XL413组细胞凋亡率明显高于XL413和CBP单药组,差异有统计学意义（P＜0.01）。（3）Western blot实验结果显示CBP→XL413序贯联合治疗组RAD51蛋白表达水平明显较CBP单药治疗组低,而γH2AX蛋白表达水平明显较CBP单药治疗组增高;同样在免疫荧光实验中,CBP→XL413序贯联合治疗组细胞内RAD51焦点数目明显较CBP单药治疗组减少,而γH2AX焦点数目明显较CBP单药治疗组增多（P＜0.001）。（4）裸鼠皮下瘤及腹腔转移瘤模型均显示CBP→XL413这种序贯联合方案可以显著抑制肿瘤生长,皮下瘤治疗结束后肿瘤体积和重量均明显小于XL413和CBP单药组,差异有统计学意义（P＜0.05）。序贯联合治疗组RAD51和Ki67表达明显减少,而γH2AX表达增加。（5）平板克隆实验结果显示XL413给药72 h之后撤药导致肿瘤很快恢复再生长,而先用CBP预处理24 h,XL413给药72 h再撤药导致克隆形成数目明显减少。裸鼠OVCAR-3皮下瘤模型治疗3周后停药继续观察,发现CBP→XL413联合治疗组肿瘤再复发时间明显延长。结论:卡铂序贯联合CDC7抑制剂XL413可以增强卡铂对卵巢癌细胞的化疗效果,其机制可能是CDC7抑制剂XL413通过抑制同源重组修复活性,增加了化疗诱导的DNA损伤的积累。因此,我们的研究为提高铂类对卵巢癌的化疗效果提供了一种新策略。