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【目的】对乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus， HBV)相关性肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）、HBV相关性肝硬化（HBV-related livercirrhosis，HBC）和慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）患者外周血中乙肝病毒羧基末端截短型中蛋白（Truncated middle surface protein，MHBst）基因进行突变筛查，明确相应患者外周血中是否存在MHBst基因突变及其突变类型，探讨MHBst基因突变在HBV相关性HCC发生和发展过程中可能的作用机制及其意义，并构建一种简易方法检测新型MHBst基因突变。【方法】分别提取96例HBV相关性HCC患者、40例HBC和51例CHB患者的血清HBV基因组DNA，PCR法扩增preS2/S基因片段，将扩增出的片段送公司测序，检测是否存在MHBst基因突变及其突变类型；比较HCC组与非HCC组（HBC、CHB）外周血中MHBst基因突变率；比较原发性肝细胞癌患者外周血MHBst基因状态与患者临床病理指标及肿瘤组织中核因子-κB（Nuclearfactor-kappa B，NF-κB）表达之间的关系；最后通过构建TaqMan-MGB探针法(TaqMan-MGB probe-based real-time fluorescent quantitative PCR)检测新发现的MHBst基因突变。【结果】1.在187例血清标本中发现2种MHBst基因突变，都为点突变，这2种突变分别为MHBst78（G>T）和MHBst165（C>A），其中MHBst78（G>T）既往报道过，而MHBst165（C>A）为新发现类型；2.HCC患者外周血中MHBst基因突变率为57.3%（55/96）较非HCC组（HBC、CHB）外周血中MHBst基因突变率为40.7%（37/91）明显增高（P＝0.023）；MHBst基因状态与患者年龄、性别、甲胎蛋白、脉管侵犯、肿瘤大小、肿瘤分化均无关（P＞0.05）；外周血中存在MHBst基因突变的HCC患者较外周血中无MHBst基因突变的HCC患者肿瘤组织中NF-κB表达量明显增高（P＝0.035）；3.通过构建TaqMan-MGB探针法可有效检测出标本中的MHBst165（C>A）突变。【结论】1.本研究新发现一种MHBst基因突变类型MHBst165（C>A）；2. HCC患者体内存在较高的乙肝病毒MHBst基因突变率，MHBst在HCC患者体内可能是通过上调NF-κB的表达参与HCC的发生；3.TaqMan-MGB探针法操作简便、快捷，可以用于大规模样本中MHBst165（C>A）基因突变的筛查。