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【目的】对乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)相关性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)、HBV相关性肝硬化(HBV-related livercirrhosis,HBC)和慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者外周血中乙肝病毒羧基末端截短型中蛋白(Truncated middle surface protein,MHBst)基因进行突变筛查,明确相应患者外周血中是否存在MHBst基因突变及其突变类型,探讨MHBst基因突变在HBV相关性HCC发生和发展过程中可能的作用机制及其意义,并构建一种简易方法检测新型MHBst基因突变。【方法】分别提取96例HBV相关性HCC患者、40例HBC和51例CHB患者的血清HBV基因组DNA,PCR法扩增preS2/S基因片段,将扩增出的片段送公司测序,检测是否存在MHBst基因突变及其突变类型;比较HCC组与非HCC组(HBC、CHB)外周血中MHBst基因突变率;比较原发性肝细胞癌患者外周血MHBst基因状态与患者临床病理指标及肿瘤组织中核因子-κB(Nuclearfactor-kappa B,NF-κB)表达之间的关系;最后通过构建TaqMan-MGB探针法(TaqMan-MGB probe-based real-time fluorescent quantitative PCR)检测新发现的MHBst基因突变。【结果】1.在187例血清标本中发现2种MHBst基因突变,都为点突变,这2种突变分别为MHBst78(G>T)和MHBst165(C>A),其中MHBst78(G>T)既往报道过,而MHBst165(C>A)为新发现类型;2.HCC患者外周血中MHBst基因突变率为57.3%(55/96)较非HCC组(HBC、CHB)外周血中MHBst基因突变率为40.7%(37/91)明显增高(P=0.023);MHBst基因状态与患者年龄、性别、甲胎蛋白、脉管侵犯、肿瘤大小、肿瘤分化均无关(P>0.05);外周血中存在MHBst基因突变的HCC患者较外周血中无MHBst基因突变的HCC患者肿瘤组织中NF-κB表达量明显增高(P=0.035);3.通过构建TaqMan-MGB探针法可有效检测出标本中的MHBst165(C>A)突变。【结论】1.本研究新发现一种MHBst基因突变类型MHBst165(C>A);2. HCC患者体内存在较高的乙肝病毒MHBst基因突变率,MHBst在HCC患者体内可能是通过上调NF-κB的表达参与HCC的发生;3.TaqMan-MGB探针法操作简便、快捷,可以用于大规模样本中MHBst165(C>A)基因突变的筛查。