【摘 要】
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研究目的本研究旨在探讨正丁酸钠对严重烧伤患者血清刺激脐静脉血管内皮细胞后血管通透性和内皮糖萼层的影响以及初步分子机制。方法1.根据纳入和排除标准从安徽医科大学第一附属医院高新院区烧伤科招募5例大面积成年烧伤患者,面向社会招募5名健康成年人,采集血液标本后即刻离心编号后保存血清。2.以脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）作为研究对象,本实验分为3个阶段:（1）分别用收集的烧伤患者血清和健康成人血清刺激
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研究目的本研究旨在探讨正丁酸钠对严重烧伤患者血清刺激脐静脉血管内皮细胞后血管通透性和内皮糖萼层的影响以及初步分子机制。方法1.根据纳入和排除标准从安徽医科大学第一附属医院高新院区烧伤科招募5例大面积成年烧伤患者,面向社会招募5名健康成年人,采集血液标本后即刻离心编号后保存血清。2.以脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）作为研究对象,本实验分为3个阶段:（1）分别用收集的烧伤患者血清和健康成人血清刺激培养的HUVECs,分正常血清组、烧伤血清12h组和烧伤血清24h组。采用q-PCR法测细胞内带状闭合蛋白1（ZO-1）m RNA的表达,Transwell法检测单层内皮细胞通透系数（Pa）,观察内皮细胞血管通透性的改变,选取最佳刺激时相。（2）HUVECs复苏后,分为以下四组:正常血清组、烧伤血清组、低浓度正丁酸钠（SB）组和高浓度SB组。采用WB法测细胞内ZO-1蛋白的表达,ELISA法测细胞上清液中血管内皮钙粘蛋白（VE-cadherin）和多配体蛋白聚糖-1（SDC-1）的脱落量,Transwell法检测Pa值,透射电镜下观察内皮细胞糖萼层的变化,探索SB的最佳剂量和对内皮细胞血管通透性以及糖萼的影响。（3）HUVECs复苏后,分为以下四组:正常血清组、烧伤血清组、烧伤血清+SB组和烧伤血清+SB+VEGF抑制剂组,采用WB法检测HUVECs的缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）与基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的蛋白表达。结果1.烧伤血清组ZO-1 m RNA的表达量显著低于正常血清组（P＜0.0001）,并且刺激12h组的ZO-1 m RNA表达量低于24h组（P＜0.0001）;烧伤血清刺激HUVECs后Pa值明显高于正常血清组（P＜0.0001）,但烧伤血清12h组和烧伤血清24h组的Pa值差异无统计学意义（P＞0.05）。2.高浓度SB组细胞内ZO-1蛋白表达量明显高于烧伤血清组（P＜0.05）,但低浓度SB组与烧伤血清组、高浓度SB组差异均无统计学意义（P＞0.05）。烧伤血清组细胞上清液中VE-cadherin水平明显高于正常血清组（P＜0.05）,高浓度SB组的VE-cadherin水平明显低于烧伤血清组与低浓度SB组（P＜0.05）,但低浓度SB组的VE-cadherin水平与烧伤血清组无明显差异（P＞0.05）。高浓度SB组与低浓度SB组的Pa值均低于烧伤血清组（P＜0.05）,高浓度SB组的Pa值低于低浓度SB组（P＜0.05）。烧伤血清组中的SDC-1脱落量明显高于正常血清组（P＜0.05）,低浓度SB组与高浓度SB组的SDC-1脱落量均明显低于烧伤血清组（P＜0.05）,且高浓度SB组的SDC-1脱落量低于低浓度SB组（P＜0.05）。烧伤血清+SB各组相比于烧伤血清组来说,糖萼层更浓密、结构的破坏程度较轻,以3mmol/L组最明显。3.烧伤血清组的HIF-1α,VEGF和MMP-9的蛋白表达量均明显高于正常血清组（P＜0.05）;烧伤血清+SB组的HIF-1α,VEGF和MMP-9的蛋白表达量均明显低于烧伤血清组（P＜0.05）,但仍高于正常血清组（P＜0.05）;烧伤血清+SB+VEGF抑制剂组的VEGF和MMP-9的蛋白表达量明显低于烧伤血清组和烧伤血清+SB组（P＜0.05）。结论正丁酸钠可通过抑制HIF-1α/VEGF/MMP-9信号通路的活化减轻严重烧伤后血管内皮细胞糖萼层的损伤,从而改善严重烧伤引起血管内皮细胞通透性的增加。
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