论文部分内容阅读
本研究以安徽地方优良猪种(皖南黑猪、圩猪、霍寿黑猪、安庆六白猪)和外来品种大白猪为材料,研究抗F18大肠杆菌的候选基因之一,TAP1基因的单链核苷酸多态性(single nucleotide polymerphisms, SNPs)及其与断奶仔猪部分免疫指标的相关性。根据GenBank猪TAP1(登录号BX323833)序列设计引物,采用PCR-SSCP技术检测TAP1全部基因编码区11个外显子区域的遗传变异,筛查SNPs位点分析其多态性,并运用SPSS程序中的GLM模型分析所检测到的遗传变异与部分血清免疫指标的关联性。旨在寻找地方猪种中可以作为抗F18大肠杆菌或者一般抗病性的有效遗传标记,为安徽省地方猪种质资源特性及MAS研究提供分子生物学参考。经研究发现:(1)TAP1基因的84bp在霍寿黑猪群体中检测到T→C突变,其他四个群体在该位点没有检测到突变;该基因的443bp在试验的5个群体中均检测到G→A突变;该基因的6297、6298bp在圩猪、皖南黑猪和霍寿黑猪群体中检测到G→C、G→T突变,安庆六白猪和大白猪种没有检测到;该基因的7570bp在5个群体中均检测到G→A突变。(2)TAP1基因84bp处突变为错义突变,使编码的氨基酸由色氨酸变成了精氨酸,在霍寿黑猪中检测到三种基因型(AA、AB和BB),其中AA(野生型)基因型频率为67.32%,AB基因型频率24.84%,BB(突变性)基因型频率为7.84%。霍寿黑猪的多态信息含量(PIC)为0.2709,在该位点处于中度多态,在其他四个群体中均没有检测到该突变位点,均为野生型。TAPl基因443bp处突变为无义突变,没有引起氨基酸的改变,在圩猪、皖南黑猪、安庆六白猪、霍寿黑猪和大白猪群体中均检测到了三种基因型(CC、CD、DD),其中CC(野生型)基因型频率在这5个群体中分别为9.21%、12.63%、17.24%、62.09%、10.92%,CD基因型频率分别为31.58%、25.26%、31.03%、29.41%、29.31%,DD基因型频率分别为59.21%、62.11%、51.72%、8.5%、25.57%。上述5个群体的多态信息含量(PIC)分别为0.3047、0.3063、0.3435、0.2929、0.3082,在该位点均处于中度多态。TAPl基因6297bp和6298bp处突变为连锁突变,前者使编码的氨基酸由谷氨酰胺变成了组氨酸,后者由缬氨酸变成了亮氨酸。在圩猪、皖南黑猪、霍寿黑猪群体中均检测到两种基因型(EE和EF),其中EE基因型频率在这3个群体中分别为79.18%、66.67%、92.16%,EF基因型频率分别为20.83%、33.33%、7.8%。圩猪、皖南黑猪、霍寿黑猪的多态信息含量(PIC)分别为0.1706、0.2409、0.0725,在该位点均处于低度多态。在安庆六白猪和大白猪群体中没有检测到该突变位点,均为野生型。TAP1基因7570bp处突变为无义突变,没有引起氨基酸的改变。在圩猪、皖南黑猪、安庆六白猪、霍寿黑猪和大白猪群体中均检测到了三种基因型HH),其中其中GG(野生型)基因型频率在这5个群体中分别为17.97%、7.80%、7.97%、11.76%、6.45%,GH基因型频率分别为40.76%、32.62%、12.50%、33.33%、23.82%,HH基因型频率分别为41.27%、59.53%、79.53%、54.90%、69.73%。上述5个群体的多态信息含量(PIC)分别为0.3611、0.2991、0.2142、0.3242、0.2535,其中安庆六白猪在该点位处于低度多态,其他均处于中度多态。(3)χ2检验表明:T84C位点在霍寿黑猪中显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P口0.05),G443A位点在皖南黑猪和大白猪种中显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.01),G7570A位点在安庆六白猪中显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.01),其余各位点在检测到的群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。(4)品种间各免疫指标差异分析:IL-6在安庆六白猪的含量显著高于大白猪(P<0.01);IL-12在圩猪的含量显著低于安庆六白猪和大白猪(P<0.05);IFNγ在圩猪中的含量显著高于安庆六白猪和大白猪(P<0.01),在大白猪中的含量显著高于安庆六白猪(P<0.01);TNFα在大白猪中的含量显著低于安庆六白猪和圩猪(P<0.01)。(5)G443A位点各品种内免疫指标相关性分析:圩猪中,GG基因型个体IL-6 IFNγ和TNFα含量显著高于GA基因型(P<0.05);大白猪种AA基因型个体IL-10含量显著高于GA基因型(P<0.05)。(6)G7570A位点各品种内免疫指标相关性分析:在安庆六白猪中,AA基因型个体IL-10含量显著高于GA基因型(P<0.05);大白猪中GA和AA基因型个体IFNγ含量显著高于GG基因型(P<0.05)。研究结果提示:TAP1基因G443A位点、G7570A位点有可能作为有效靶位点应用于霍寿黑猪、安庆六白猪、圩猪和大白猪抗F18大肠杆菌育种。