has-microRNA-218-5p负性调控HMGB1抑制结直肠癌细胞增殖的研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:tianjuyy
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目的:寻求结直肠癌中可靶向调节HMGB1表达的特定microRNA,研究此种特定microRNA通过调节HMGB1的表达抑制结直肠癌细胞的增殖,为结直肠癌的靶向治疗提供新的理论依据。方法:1、通过TargetScan、miRanda等miRNA数据库,利用生物信息学的方法,预测能够靶向调节HMGB1的miRNA,寻找并选择在各数据库中均存在的特定miRNA,将其作为研究对象。2、收集42例结直肠癌手术患者的癌组织和癌旁组织,通过半定量PCR和免疫组化法检测miR-218-5p和HMGB1的表达情况并分析。3、为了验证结直肠癌中miR-218-5p是否对HMGB1的表达产生作用,分别转染miR-218-5p mimic(miR-218-5p模拟物)、miR-218-5p inhibitor(miR-218-5p抑制剂)于结直肠癌细胞系HT29中,使用双荧光素酶报告基因分析结果。4、为了验证miR-218-5p是否通过靶向作用于HMGB1负性调控结直肠癌细胞的增殖,分别转染miR-218-5p mimic和miR-218-5p inhibitor及其NC组于结直肠癌HT29细胞系中:1)MTT法检测比较HT29的增殖速率;2)PCR检测比较各组HMGB1 mRNA的含量;3)BCA法、Western blot法检测比较各组HMGB1总的蛋白表达水平。结果:1、miR-218-5p在结直肠癌组织中的表达明显低于癌旁组织,而HMGB1在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织。2、在42例患者中,有19例出现明显结肠外转移,23例无结肠外转移,而miR-218-5p在发生转移的结直肠癌组织中的表达低于在结直肠癌组织中的表达,而HMGB1的表达前者高于后者。3、在TNM分期中,T1,T2,T3和T4期分别有17,14,6,5例,miR-218-5p在T3和T4中表达最低,在T1期表达最高,而HMGB1的表达则呈相反趋势。4、转染结直肠癌细胞系HT29实验中,miR-218-5p mimic组结直肠癌细胞的生长速率明显低于miR-218-5p inhibitor组,而在HMGB1 mRNA及蛋白表达水平上,miR-218-5p mimic组明显低于miR-218-5p inhibitor组。结论:在体外环境结直肠癌细胞中,miR-218-5p通过负性调控HMGB1的表达而抑制结直肠癌细胞的增殖。
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