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目的:探讨疏肝、健脾、活血、祛湿、综合等中医不同治法方药对脂肪肝大鼠肝细胞信号转导通路的影响,比较不同治法方药防治脂肪肝作用的差异并揭示其作用机制。
方法:利用高脂饲料喂养、白酒灌胃复制大鼠脂肪肝动物模型,同时给予疏肝、健脾、活血、祛湿、综合不同方药进行干预。12周后处死大鼠,检测血清中TC、TG、ALT、AST等含量;取肝组织,观察其病理形态学的变化;应用免疫组织化学方法检测NF-кB<65><,P>在各组肝组织中的表达;分离肝Kupffer细胞,采用Western blot方法检测大鼠Kupffer细胞MAPKs通路中ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白表达及磷酸化水平;用RT—PCR方法检测Kupffer细胞中CD14mRNA的表达。
结果:
1.模型组大鼠血清TC、TG、ALT和AST均较正常对照组升高(P<0.05)。各用药组TC、TG、ALT、ASI、含量与模型组比较均有下降,以疏肝组、健脾组下降最为显著(P<0.05)。
2.光镜观察:模型组大鼠肝组织呈中度至重度肝细胞脂肪变性,肝细胞增大,胞浆内脂滴大小不一,细胞水肿严重,汇管区炎细胞浸润明显,有较多灶性纤维增生,与正常组比较有显著性差异(P<0.05),提示脂肪肝模型复制成功。健脾组、疏肝组肝细胞脂肪变性与模型组比较均有显著性差异(P<0.05),表明健脾法、疏肝法有抗脂肪肝的作用。祛湿组、活血组、综合组大鼠肝细胞脂肪变与模型组比较虽有改善的趋势,但无统计学意义(P>0.05)。
3.电镜观察:模型组大鼠肝细胞内出现大量脂滴,线粒体肿胀,嵴排列紊乱,内质网肿胀。健脾组、疏肝组肝细胞结构接近正常,含少量脂滴,细胞核、线粒体、粗面内质网结构正常。其他各用药组超微结构改变情况介于模型组和疏肝组、健脾组之间。
4.对肝Kupffer细胞CD14 mRNA和肝组织NF-кB<65><,P>表达的影响:疏肝、健脾治法及方药可显著抑制肝组织NF-кB<65><,P>表达,健脾方药能显著降低Kupffer细胞CD14 mRNA的表达。
5.肝Kupffer细胞中ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白活性的变化:模型组大鼠Kupffer细胞ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白表达及磷酸化水平显著增加,各用药干预组大鼠Kupffer细胞ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白表达及磷酸化水平显著降低,其中以健脾组、疏肝组下降最为显著。
1.饮食不节、劳逸失度是脂肪肝的主要病因,肝、脾功能失调是脂肪肝的基本病机。
2.健脾法、疏肝法具有显著抗脂肪肝作用,是防治脂肪肝的重要治法。
3.健脾、疏肝治法及方药可能通过调节脂质代谢、减轻肝脏脂肪变性、保护肝细胞、减轻肝细胞炎症反应、改善肝功能等发挥防治脂肪肝的作用。
4.健脾、疏肝治法及方药抑SUTH~肪肝大鼠肝组织NF=KB<65><,P>的表达,降低Kupffer细胞ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白活性及其磷酸化水平,可能是防治脂肪肝的主要作用机制之一。当然,其防治脂肪肝可能是多途径、多层次、多环节不同药理作用的结果,有关作用机制还有待于进一步深入研究和探讨。