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杨梅(Myrica rubra Sieb.et Zucc.)是我国重要的果树资源,有着2000多年的栽培历史,杨梅叶常绿,原花色素(PAs)含量高,以独特的表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯(EGCG)作为其末端单元和大部分延伸单元,具有抗氧化,抗菌,减肥,抗癌和抗炎活性,然而其神经保护活性尚未见诸报道。杨梅叶原花色素的平均聚合度(mDP)(～6.7)低于葡萄籽(GSPA)和蓝莓的原花色素,由于平均聚合度与其活性密切相关,研究不同聚合度的原花色素对其神经保护活性的影响值得进一步探讨。本研究基于β-淀粉样蛋白(Aβ)模型,以杨梅叶原花色素单体(EGCG)为阳性对照,研究了两种杨梅叶原花色素(BLPs)(Sephadex-LH20 纯化的 BLPs(SPBLPs)和超声降解的 BLPs(UDBLPs))的神经保护作用,并分别通过分子、细胞和动物层面确定了其在抑制Aβ寡聚化,空间结构转变和神经毒性,阻断SH-SY5Y神经细胞凋亡,改善模式小鼠学习与空间记忆功能,减少脑内斑块的沉积的潜在功能和可能的机制。结果如下:1.杨梅叶原花色素能通过与Aβ结合形成复合物来干扰Aβ的自发聚集作用,从而抑制Aβ原纤维生成,Aβ形态变化和Aβ二级结构转变,并且呈现剂量依赖关系。通过Aβ与原花色素结合时热力学函数的变化得出,低平均聚合度的原花色素与Aβ具有更加紧密的结合作用。分子对接模拟结果显示,随着平均聚合度mDP的变化,原花色素靶向Aβ的结合位点也有所不同,低平均聚合度的原花色素更加靠近N端区域与核心疏水区HHQK序列,形成的复合物也更加稳定。2.杨梅叶原花色素能减轻Aβ寡聚体诱导的神经细胞毒性作用,影响神经细胞的存活状态,同时,UDBLPs的作用比SPBLPs强得多,在Aβ诱导的细胞毒性模型中两种杨梅叶原花色素的神经保护作用均在20μg/mL的剂量达到最大值。免疫印迹结果显示,杨梅叶原花色素能够上调Bcl-2与Bax比值,同时下调下游的caspase-3表达水平,从而进一步阻断由Aβ寡聚体诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡。3.为了进一步探究杨梅叶原花色素在神经保护活性上与葡萄籽原花色素(GSPA)的差别,选取活性较好的低聚原花色素UDBLPs、EGCG与GSPA进行比较。动物实验表明,四个月大的APP/PSN转基因小鼠在经过UDBLPs,GSPA和EGCG药物干预两个月以后,经过Morris水迷宫测试后发现,低聚杨梅叶原花色素能够较为明显地改善小鼠的学习与空间记忆水平。免疫组化与免疫印迹结果显示,相比于空白对照组,经过低聚杨梅叶原花色素干预后的APP/PSN小鼠顶叶,海马和颞叶老年斑的区域和大小都得到了显著地降低,低聚杨梅叶原花色素也能够减少海马和皮层区域的Aβ蛋白的含量,同时低聚杨梅叶的神经保护效果要好于葡萄籽原花色素。本研究首次报道了不同平均聚合度的杨梅叶原花色素对Aβ诱导的毒性的抑制作用,超声处理后的杨梅叶原花色素可以提高其神经保护作用。据此可以推测杨梅叶原花色素可作为预防阿尔茨海默病的潜在新型天然产物。