蛹虫草黄色素分离纯化、结构鉴定及其抗氧化活性研究

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蛹虫草与难以人工栽培的冬虫夏草具有相似的药理价值,以其独特的功能特性和简便的栽培模式受到越来越多的关注。目前对于蛹虫草的研究仅限于调查分类、生物活性初步筛选以及化学成分的比较,但对其子实体中天然黄色素的研究鲜见报道。本文对蛹虫草黄色素分离纯化、抗氧化活性及其稳定性进行了研究,为蛹虫草黄色素作为抗氧化剂及其在功能性食品中的应用提供理论基础。本论文的研究内容和所得结果如下:  (1)蛹虫草黄色素的分离纯化及结构鉴定研究。通过对7种大孔树脂对蛹虫草黄色素的静态吸附解吸性能和动态吸附解吸性能研究,确定了HP-20树脂对蛹虫草黄色素的分离纯化效果最佳。再采用Diaion HP-20大孔吸附树脂、反相硅胶和制备液相等方法,对蛹虫草水提液中的黄色素进行了分离纯化,并使用质谱和核磁共振技术对其进行了结构鉴定。结果表明:从蛹虫草水提液中分离出了3种不同的蛹虫草黄色素YP1、YP2和YP3,分子量分别为524.3,376.1,242。  (2)蛹虫草黄色素的色价研究。采用GB5525的重铬酸钾溶液比色法,检测大孔树脂柱层析、反相硅胶柱层析和过制备液相的收集样的色价。结果表明经大孔树脂柱层析、反相硅胶柱层析和制备液相分离,蛹虫草黄色素YP1、YP2和YP3的色价分别提高了29.8倍、33.4倍和35倍;三种蛹虫草黄色素单体的色价大小顺序为:YP3>YP2>YP1,且三者间的色价存在显著差异。  (3)蛹虫草黄色素YP1稳定性研究。采用高效液相色谱法(HPLC),以蛹虫草黄色素YP1的保留率为指标,考察蛹虫草黄色素YP1对光照、热、酸碱、金属离子及耐氧稳定性进行了研究。结果显示:影响蛹虫草黄色素YP1光稳定性大小顺序为:太阳光>白炽灯光>紫外光>避光;低温下热稳定性良好,60℃以上不稳定;酸碱稳定性大小顺序为:酸性>中性>碱性;金属离子Na+、K+、Ca2+、Mg2+对其影响较小;氧气对YP1有一定影响,敞口放置9h后的含量与绝氧放置的样品存在显著差异。  (4)三种蛹虫草黄色素抗氧化活性研究。采用DPPH·自由基清除能力、·OH自由基清除能力、ABTS·自由基清除能力等活性评价方法,对三种不同的蛹虫草黄色素抗氧化活性进行了测定。结果表明:蛹虫草黄色素对DPPH·自由基、·OH自由基和ABTS·自由基的清除能力随浓度的增加而增加,且不同浓度的蛹虫草黄色素对这三种自由基的清除率存在显著差异(P<0.05);蛹虫草黄色素YP1、YP2和YP3是与Vc抗氧化效果相当的抗氧化剂,具有良好的清除DPPH·自由基、·OH自由基和ABTS·自由基的能力。  
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