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单纯疱疹病毒（herpes simplex virus, HSV）是一种流行于全世界的疱疹性疾病病原体,根据病原性的差异分为HSV-1型和HSV-2型,HSV-1除引起常见的黏膜性疱疹外,还可引起疱疹性角膜炎和疱疹性脑炎,前者严重的可引起失明,后者则常伴有较重的神经系统后遗症且可能引起死亡;HSV-2则主要通过性传播引起常见的生殖器疱疹。近年的研究还显示HSV感染可增强引起艾滋病（acquired immune deficiency syndrome, AIDS）的人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV）感染及传播的几率,因此,有效治疗HSV感染对于预防HIV的传播也具有重要的意义。目前对于HSV感染尚无有效的治疗手段,临床主要应用抑制病毒DNA复制类药物进行治疗,不能根除HSV的感染,且易产生耐药性。用疫苗预防HSV的感染多处于临床前研究阶段,造成现有疫苗效果不佳的原因之一可能是病毒的免疫逃避分子对免疫系统的影响。HSV-1病毒糖蛋白C（gC-1）可与补体C3b结合,阻止补体系统的激活,糖蛋白E（gE）和糖蛋白I（gI）则能够与抗体IgG的Fc结合,抑制补体的激活以及抗体依赖的细胞毒效应（ADCC）。近来有研究显示用gC-1和gD-1联合免疫对小鼠的保护作用要优于gD-1单独免疫,提示gC-1有可能用于增强疫苗的免疫效果。本研究在前期工作的基础上,利用分子生物学技术,构建了HSV-1 gC的真核表达载体,在CHO-K1细胞和Sp2/0细胞中表达,并对其进行了初步鉴定。1.构建了表达HSV-1 gC蛋白的真核表达载体PCI-neo-MARs-mCMV-gC1- IRES-DHFR-L22R首先用MARs-mCMV替换PCI-neo载体的启动子hCMV,阳性重组质粒命名为PCI-neo-MARs-mCMV;其次构建DHFR-L22R（即编码第22位亮氨酸L的CTT用编码精氨酸R的CGG替换）基因。将HSV-1 gC基因、IRES基因和DHFR-L22R基因先后克隆入经过改造的PCI-neo-MARs-mCMV载体,酶切鉴定获得阳性重组质粒PCI-neo-MARs-mCMV-gC1-IRES-DHFR-L22R,大量制备重组质粒并测定DNA浓度与纯度。2.稳定表达HSV-1 gC蛋白的CHO-K1细胞系与Sp2/0细胞系的建立与筛选将大量制备的重组质粒PCI-neo-MARs-mCMV-gC1-IRES-DHFR-L22R按照LipofectamineTM 2000说明书转染CHO-K1细胞与Sp2/0细胞,在G418和氨甲喋呤（MTX）双筛选压力下筛选稳定转染细胞系,Slot blot方法检测表明细胞能稳定表达目的蛋白HSV-1 gC。3.HSV-1 gC蛋白的表达与鉴定将筛选出的稳定转染细胞系培养并收集上清,超滤浓缩后用His-Ni琼脂糖填料进行目的蛋白纯化,纯化后SDS-PAGE和Western blot分析表明,成功的表达了目的蛋白gC-1,且其具有良好的特异性结合活性,为进一步的实验研究和临床应用提供了基础。