针刺环跳、委中穴对坐骨神经痛大鼠CCL2-CCR2和小胶质细胞活化的影响

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目的:通过检测坐骨神经痛大鼠神经损伤部位的趋化因子CCL2及其受体CCR2和小胶质细胞活化的标记物Iba-1的变化,研究针刺环跳穴、委中穴对坐骨神经痛大鼠CCL2-CCR2表达和小胶质细胞活化的调控作用,以及穴位配伍与单穴、环跳穴与委中穴疗效差异的对比,探究针刺镇痛的趋化因子、小胶质细胞活化通路,为针灸治疗坐骨神经痛的临床选穴提供新的依据和参考。材料与方法:本实验选用SPF级SD雄性大鼠40只,体重130-170g,采用随机数字表法进行分组,分别分为空白组、模型组、环跳组、委中组、环跳联合委中组,每组内含大鼠8只,适应性饲养7d后造模。空白组不做任何处理,其余各组应用钳夹法制备坐骨神经损伤大鼠模型。8d进行模型评价,用SPSS 24.0分析热刺痛缩足反应潜伏期(PWTL)指标,P<0.05,具有统计学意义,造模成功后开始针刺治疗。干预方法:环跳组直刺环跳穴,进针深度10mm,留针20min;委中组直刺委中穴,进针深度5mm,留针20min;环跳联合委中组同时针刺环跳穴和委中穴,针刺方法同单穴。三组常规针刺不通电治疗,连续治疗14天,末次治疗后6h进行行为学测定,包括PWTL和坐骨神经功能指数(SFI),完成测定后取材。取大鼠脊髓、患侧坐骨神经损伤段,采用苏木-伊红精(HE)染色法观察损伤坐骨神经形态学变化,免疫组织化学法测定小胶质细胞活化标记物Iba-1的表达,酶联免疫吸附法测定趋化因子CCL2-CCR2的蛋白表达水平,并进行统计学分析。结果:1.各组大鼠坐骨神经功能指数(SFI):模型评价结果显示,应用钳夹法造模后的各组大鼠SFI值明显低于空白组未造模大鼠,经统计学分析具有明显差异性(P<0.05),证明造模成功。进行为期14天的针刺干预治疗,各组的SFI值均升高且高于模型组(P<0.05),SFI值环跳联合委中组最高,环跳穴组次之(P<0.05)。2.各组大鼠热缩足反射潜伏期(PWTL):第8天进行模型评价,模型组大鼠PWTL值低于空白组,具有显著差异性(P<0.05),造模成功。治疗14天后,针刺干预各组的PWTL值均较模型组升高(P<0.05),环跳联合委中组升高程度大于环跳组,环跳组大于委中组(P<0.05)。3.各组大鼠坐骨神经损伤部位HE染色:空白组神经纤维分布整齐,排列紧密,连续性完好;模型组神经纤维分布紊乱;针刺治疗组与模型相较神经纤维病理变化减轻,均较模型组连续性更佳,环跳联合委中组恢复明显,优于单穴组,环跳组优于委中组。4.各组大鼠小胶质细胞特异性标记物Iba-1的表达:模型组的平均光密度较空白组显著性升高(P<0.05)。针刺治疗后各组阳性细胞表达较模型组减少(P<0.05),环跳联合委中组平均光密度值低于环跳组(P<0.05)。5.各组大鼠趋化因子CCL2及其受体CCR2表达水平:模型组的CCL2和CCR2的水平较空白组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);针刺治疗组的CCL2和CCR2水平较模型组均有明显降低(P<0.05);针刺治疗三组CCL2和CCR2的表达由低到高排序为环跳联合委中组、环跳组、委中组。结论:1.针刺环跳穴、委中穴对坐骨神经损伤所致的神经病理性疼痛均可起到抑制作用,并可促进神经损伤后的修复,环跳穴委中穴联合使用优于单穴取穴,单取环跳穴优于单取委中穴。2.针刺的镇痛作用可能基于趋化因子CCL2-CCR2通路,可以抑制趋化因子CCL2的表达,影响其与受体CCR2的结合,从而减轻疼痛。3.针刺环跳、委中穴可以促进坐骨神经损伤后的修复,其作用机制可能与小胶质细胞活化有关。
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