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阿特拉津和毒死蜱分别为三氮苯类除草剂和有机磷类杀虫剂。近年来,阿特拉津和毒死蜱因使用量大、残留期长、环境水体中检出率高和具有内分泌干扰作用等而受到广泛关注。作为分子伴侣的热休克蛋白,能够在环境应激时增加表达,修复受损蛋白,提高生物体对应激的耐受能力。热休克蛋白在应激中迅速上升这一生物学特性使它成为监测生物体应激状况的一种理想的生物指标。本试验以鲤鱼(Cyprinus carpio)为模式动物,在制备兔抗鲤鱼HSP60、HSP70和HSP90多克隆抗体的基础上,应用实时定量荧光PCR法与免疫印迹法检测了阿特拉津(428、42.8和4.28μg/L)、毒死蜱(116,11.6和1.16μg/L),以及毒死蜱和阿特拉津混合物(113、11.3和1.13μg/L)暴露40d和恢复40d时鲤鱼肝脏、脑、肾脏、鳃以及头肾和脾脏中热休克蛋白(HSP60、HSP70和HSP90)含量与mRNA表达。结果表明:1.利用原核表达载体表达了鲤鱼HSP60、HSP70和HSP90融合蛋白,将其免疫新西兰白兔,成功制备了兔抗鲤鱼HSP60、HSP70和HSP90多克隆抗体。2.阿特拉津暴露使鲤鱼头肾、脾脏和脑中HSP60的表达呈现上升趋势,毒死蜱单独及联合暴露能使头肾中HSP60的表达量逐渐上升。在肾脏中,HSP60的表达被低剂量农药所诱导,被高剂量毒死蜱及联合组抑制。在鳃中,HSP60的表达呈现明显的下降趋势(P<0.05)。3.除肾脏毒死蜱与联合暴露,以及鳃单一与联合暴露中HSP70的表达被明显的抑制外,其它组织在所有染毒组HSP70的表达量均增加(P<0.05),且毒物浓度与HSP70的表达量呈明显的剂量依赖关系。4.在阿特拉津暴露的鲤鱼脑和头肾组织中以及毒死蜱暴露的鲤鱼脑组织中,HSP90表达量在低剂量组明显升高(P<0.05);在毒死蜱暴露的鲤鱼脾脏和头肾组织中以及混合暴露的鲤鱼脾脏中,HSP90表达量的峰值出现在中剂量组。在肝脏和肾脏中HSP90表达只在高剂量的农药暴露时增加明显。在鳃中,随毒物浓度的升高HSP90的表达量逐渐降低(P<0.05)。综上所述,阿特拉津、毒死蜱以及它们的混合物能够增加肝脏、脑、头肾和脾脏中热休克蛋白的表达,表明热休克蛋白在阿特拉津和毒死蜱发挥毒性过程中起着重要作用,增加热休克蛋白的表达是鲤鱼对抗农药应激的保护方式之一;而肾脏和鳃中的热休克蛋白被抑制,提示我们在农药应激时热休克蛋白的表达具有组织特异性。本试验证实了脑、肝、头肾和脾脏中HSP70可作为阿特拉津和毒死蜱单一及联合暴露的生物指标;鳃组织中HSP90mRNA表达水平可作为阿特拉津和毒死蜱单一及联合暴露的生物指标。