【摘 要】
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目的本实验通过忽地笑(又名黄花石蒜,Lycoris aurea)加兰他敏合成途径中的关键酶COMT基因,构建质粒并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中的表达,已获得目的蛋白。方法根据忽地笑加兰
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目的本实验通过忽地笑(又名黄花石蒜,Lycoris aurea)加兰他敏合成途径中的关键酶COMT基因,构建质粒并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中的表达,已获得目的蛋白。方法根据忽地笑加兰他敏合成途径中的关键酶COMT基因开放阅读框架设计引物,以忽地笑花所提取出的cDNA为模板进行PCR,纯化扩增产物经双酶切,进行TA克隆,构建PMD-COMT,质粒提取双酶切；再克隆到PET-30a中。重组质粒PET-COMT,经验证后转化到大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,经IPTG诱导表达,用SDS-PAGE电泳鉴定表达产物。结果获得的1101bp的基因片段经PCR和双酶切鉴定后与预期大小一致;SDS-PAGE电泳分析显示诱导菌在40KD出现一条明显蛋白带,与预期分子量相符。结论成功构建PET-COMT,并在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,为进一步研究忽地笑加兰他敏生物合成代谢途径中关键酶提供基础。
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