研究背景肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是肝胆系统中最常见的恶性肿瘤,在世界范围内位居男性肿瘤发病率的第五位。乙型肝炎病毒（HBV,乙肝）感染是导致我国肝癌高发的主要原因,其中乙肝感染导致的肝细胞相关基因DNA甲基化水平改变是导致肝细胞肝癌发生的重要机制。目前,手术切除是治疗肝癌的首选方式。但是,大部分患者确诊时已是中晚期且缺乏有效的预后及治疗靶标,所以,我国肝癌的5年生存率仍然处于较低水平。因此,探讨乙肝相关肝癌的发病机制及肝癌的预后和治疗靶标意义重大。研究目的1、探讨GNA14在肝癌中的表达变化及其DNA甲基化调节机制2、探讨GNA14对肝癌的抑制作用及其分子机制研究方法1、本研究通过TCGA及GEO数据库中肝癌组织及癌旁组织的mRNA及DNA甲基化数据的联合分析,发现了一个潜在的肝癌抑癌基因-GNA14,同时通过分析其与网络数据库中临床病理信息的相关性明确其临床价值。通过相对荧光定量PCR（q RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western Blot）及免疫组化技术（IHC）对本院肝癌临床样本中GNA14的表达量进行检测,并分析其与临床病理信息的相关性从而验证数据库中的信息。2、通过正常肝细胞、永生化肝细胞、肝癌细胞及临床样本的DNA甲基化测序明确GNA14启动子区甲基化变化情况。3、分析本院以及数据库中感染乙肝肝癌患者与未感染乙肝肝癌患者癌组织中GNA14的mRNA水平和DNA甲基化水平。通过对Hep G2细胞及感染了HBV的Hep G2细胞（Hep G2.2.15）和感染乙肝的肝癌患者及未感染乙肝的肝癌患者的肝癌组织中GNA14的表达量检测及DNA甲基化测序,进一步明确乙肝感染对GNA14的影响。通过对Hep G2.2.15细胞中乙肝X蛋白（HBx）的敲低,分析HBx对DNA甲基转移酶（DNMTs）及GNA14的调节作用。通过在Hep G2等细胞中过表达HBx分析HBx对DNA甲基转移酶（DNMTs）及GNA14的调节作用。通过Ch IP实验明确DNMTs对GNA14的调节作用。通过双荧光素酶报告基因实验证实HBx通过调节DNMTs导致GNA14表达量的变化。4、在肝癌细胞HCCLM3、Huh7中敲低GNA14,在肝癌细胞SK-Hep-1及Hep3B细胞中稳定过表达GNA14。通过CCK-8、细胞周期、Transwell细胞侵袭、转移实验、裸鼠皮下成瘤模型以及裸鼠肝脏原位肿瘤模型,分析GNA14抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭的作用。通过免疫共沉淀蛋白质谱（IP/MS）、Co-IP实验、免疫荧光实验探讨GNA14抑制肝癌发展的分子机制。研究结果1、通过TCGA数据库、GEO数据库中肝癌数据及本院肝癌数据的对比验证,我们发现GNA14在肝癌组织中DNA甲基化上调、表达下调,且其表达量与肝癌患者的预后复发、乙肝感染、肿瘤的大小、分化和分级相关。2、乙肝感染引起了肝癌细胞中甲基化转移酶的上调并通过上调GNA14启动子区DNA甲基化水平从而抑制GNA14的表达。3、GNA14通过Notch1通路抑制肝癌细胞的增殖,通过促进JMJD6的蛋白降解抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。研究结论GNA14在肝癌组织中DNA甲基化上调、表达下调,其表达量与肝癌患者的预后复发、肿瘤的大小等相关。乙肝感染导致GNA14的启动子区DNA甲基化水平上调、mRNA水平下调从而抑制了GNA14的表达。GNA14可以抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。该研究为肝癌的防治提供了新的理论依据。