牛结核病是一种主要由牛分支杆菌引起的人畜共患的慢性消耗性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须通报的疫病，在我国属二类动物传染病。牛分支杆菌感染牛时的靶器官主要是肺，病菌可以随呼吸道分泌物排到环境中，随着病程的发展，病原菌还会随血液循环进入乳腺，进而在患病牛的乳汁中也会出现牛分支杆菌。人类饮用消毒不彻底的牛奶经消化道可能感染牛结核病菌，严重威胁到了食品卫生安全与人类健康。牛结核病的检疫手段主要包括细菌学检验、免疫学检验、分子生物学检验等方法。由于牛分支杆菌的体外培养对营养要求苛刻，且生长缓慢，常规方法对其分离时操作复杂，耗时长，且危险性高、分离的成功率不高；而免疫学方法容易出现假阳性，均不能满足快速检疫的要求。较之常规检疫方法，PCR方法具有特异性好、敏感性高、简单快速等优点,对牛分支杆菌的检测有重要意义。本研究选择牛分支杆菌pncA的基因序列中一段大小为423bp的片段作为靶序列，设计并合成一对引物，建立了牛奶中牛分支杆菌PCR技术检测方法。对所建立的方法分别进行了特异性和敏感性试验，结果表明，在添加有牛分支杆菌的牛奶中成功扩增出了423bp的特异性目的条带，而分别添加有沙门氏菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、巴氏杆菌、绿脓杆菌及枯草杆菌的对照均未扩增出任何条带。牛分支杆菌的DNA最低检测限为12.18pg/μL；牛分支杆菌污染牛奶模型的敏感性为3cfu/mL，可用于牛奶中牛分支杆菌的检测。