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目的:地榆皂苷Ⅱ是从中草药地榆中提取的一种三萜皂苷。目前的研究表明，地榆总皂苷及地榆皂苷Ⅱ具有一定的抗肿瘤活性。我们前期研究发现地榆皂苷Ⅱ体外抑制肿瘤细胞增殖的能力强于地榆总皂苷。本实验的目的在于检测地榆皂苷Ⅱ体外对于多种肿瘤细胞的抗肿瘤活性，并进一步研究地榆皂苷Ⅱ诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。 方法:使用不同浓度的地榆皂苷Ⅱ处理MDA-MB-231、HepG2、MCF-7、SKOVE3、Capan-1细胞，通过SRB法检测细胞的增殖抑制;使用Caspase-Glo3/7Assay细胞凋亡检测试剂盒检测不同浓度的地榆皂苷Ⅱ处理后，MDA-MB-231细胞的凋亡情况;使用western blot检测地榆皂苷Ⅱ对线粒体凋亡通路、内质网凋亡通路、外源凋亡通路中重要蛋白的表达影响;使用DCFH-DA探针检测地榆皂苷Ⅱ对细胞内活性氧水平的影响。 结果:1、在多种肿瘤细胞株上评价了地榆皂苷Ⅱ的细胞毒性，包括乳腺癌细胞株MDA-MB-231、乳腺癌细胞株MCF-7、卵巢癌细胞株SKOVE3、胰腺癌细胞株Capan-1、肝癌细胞株HepG2。我们发现地榆皂苷Ⅱ能剂量依赖地抑制这五种肿瘤细胞的体外增殖，初步说明地榆皂苷Ⅱ有广泛的抗肿瘤活性; 2、地榆皂苷Ⅱ处理24h后，能够有效的诱导MDA-MB-231细胞的凋亡; 3、通过DCFH-DA探针检测细胞中的活性氧水平，地榆皂苷Ⅱ(10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL)处理MDA-MB-231细胞6h后，药物处理组细胞内的ROS水平明显高于阴性对照。p-JNK、p-P38和p-P53的western blot检测发现氧化应激激活了下游的JNK和P38通路，并且上调了p-P53。抗氧化剂NAC(5mM)预处理2h后，能够明显降低15μg/mL地榆皂苷Ⅱ处理6h后，所诱导的细胞凋亡，说明激活活性氧是地榆皂苷Ⅱ抗肿瘤机制之一; 4、地榆皂苷Ⅱ剂量依赖地、并且时间依赖地上调死亡受体DR4、DR5的表达，表明地榆皂苷Ⅱ能够激活Trail外源凋亡通路。 5、地榆皂苷Ⅱ可以浓度依赖地上调内质网应激的特异性转录因子CHOP的表达。使用NAC(5mM)预处理2h后，地榆皂苷Ⅱ诱导的CHOP表达上调被有效的降低，说明地榆皂苷Ⅱ通过活性氧激活内质网应激途径; 6、地榆皂苷Ⅱ下调抗凋亡基因Bcl-2的表达，上调促凋亡基因Bax的表达，激活线粒体凋亡通路。 结论:地榆皂苷Ⅱ对多种肿瘤细胞具有体外增殖抑制作用，能够通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制肿瘤细胞的体外增殖。本实验初步探索了地榆皂苷Ⅱ对三条主要的诱导凋亡通路的影响，首次发现了地榆皂苷Ⅱ能上调DR4、DR5的表达，激活Trail介导的外源性凋亡通路，并发现地榆皂苷Ⅱ能激活内质网应激途径。本研究对地榆皂苷Ⅱ的抗肿瘤机制有了新的认识，为地榆皂苷Ⅱ作为抗肿瘤药物的下一步开发提供了理论支持。