【摘 要】
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猪圆环病毒3型（PCV3）是美国学者利用宏基因组技术于2016年首次在美国患有皮炎肾病综合征的母猪和木乃伊胎儿中发现的一种新型猪圆环病毒。自从美国报道PCV3后,中国、意大利等国家均有PCV3报道。研究显示,PCV3与猪皮炎与肾病综合征、母猪繁殖障碍、增生性坏死性肺炎等症状相关。鉴于猪圆环病毒2型对全球养猪产业带来的经济损失,急需建立针对PCV3的检测方法和防治措施。本试验利用DNA Star软件
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猪圆环病毒3型（PCV3）是美国学者利用宏基因组技术于2016年首次在美国患有皮炎肾病综合征的母猪和木乃伊胎儿中发现的一种新型猪圆环病毒。自从美国报道PCV3后,中国、意大利等国家均有PCV3报道。研究显示,PCV3与猪皮炎与肾病综合征、母猪繁殖障碍、增生性坏死性肺炎等症状相关。鉴于猪圆环病毒2型对全球养猪产业带来的经济损失,急需建立针对PCV3的检测方法和防治措施。本试验利用DNA Star软件对PCV3的Rep基因进行保守区域分析,对基因的高度保守区域,使用Primer Premier 5软件设计特异性引物,建立检测PCV3的SYBR Green I实时荧光定量PCR。试验结果:建立的方法特异性良好,除PCV3外,对其它8种猪病病毒均无扩增;建立的方法灵敏度高,最低检测量为6.55 copies/μL,构建的标准曲线R2为0.996,扩增效率为99.7%;重复性试验结果表明,组内变异系数和组间变异系数均在2%以内。临床试验结果证明该方法可以应用于PCV3的临床检测。PCV3 Cap蛋白做为PCV3主要的结构蛋白,本试验依据NCBI发表的PCV3全基因序列（MK105924.1）设计了一对用以扩增PCV3 Cap蛋白基因的特异性引物,将扩增产物连接至表达载体pET-32a（+）,将鉴定正确的重组质粒转入感受态细胞BL21（DE3）中表达PCV3 Cap重组蛋白。试验结果:含有重组质粒pET-32a（+）-PCV3-Cap的表达菌株BL21（DE3）在诱导表达后,有分子量约为35 kDa的重组蛋白表达,符合预期大小,并且PCV3 Cap重组蛋白主要以包涵体形式表达。表达条件优化结果显示,在37℃、220 r/min的条件下,表达菌株BL21（DE3）经0.8 mmol/L的IPTG诱导表达6 h,PCV3 Cap重组蛋白的表达量达到最佳。本试验通过建立PCV3 SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法和通过原核表达技术表达PCV3 Cap重组蛋白,为今后PCV3的快速诊断、流行病学调查、致病机理的研究和疫苗开发奠定基础。
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