肿瘤抑素7肽抗肿瘤活性研究

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目的:肿瘤抑素抗肿瘤活性区有两个,一个是位于N端74-98位氨基酸组成的T7肽,其具有抑制肿瘤血管生成的间接抗肿瘤活性,另一个是位于C端185-203位氨基酸构成的19肽,其具有抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡的直接抗肿瘤活性。为了进一步提高肿瘤抑素抗肿瘤活性,降低其毒副作用,缩小分子量,缩减小肽的合成成本和扩大应用范围,我们对19肽进行改造,保留19肽的抗肿瘤活性基础上缩小其分子量,采用生物合成的方法获得了纯度高达98%以上的肿瘤抑素7肽(CNYYSNS),研究其抗肿瘤活性。方法:体外增殖抑制活性实验:MTT比色实验、生长曲线、流式细胞周期实验:体外促凋亡活性实验:HE染色、TUNEL、透射电镜。结果:体外增殖抑制活性实验:MTT实验中,在不同浓度7肽作用48h后,鼠黑色素瘤细胞B16、人非小肺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG-2、人胃癌细胞SGC7901及人脐静脉内皮细胞ECV304半数抑制率IC50分别为:72.53μg/ml、92.84μg/ml、160.11μg/ml、311.38μg/ml、490.81μg/ml且呈剂量依赖性。生长曲线实验测得7肽浓度为100μg/ml时对B16、A549作用明显,改变了其生长曲线的基本走势,对HepG-2、SGC7901抑制作用次之,生长曲线的基本走势略有改变,而对人脐静脉内皮细胞的生长抑制作用较弱。流式细胞周期实验表明7肽对四种肿瘤具有周期阻滞作用,而对人脐静脉内皮细胞阻滞不明显。体外促凋亡活性实验:HE染色实验、TUNEL实验、电镜实验中肿瘤细胞实验组与对照组相比,细胞数量和形态发生了明显的变化,实验组细胞数量减少,细胞体积变小,细胞表面有小泡状突起等凋亡形态改变,其中鼠黑色素瘤细胞B16、人非小肺癌细胞A549变化最明显,人肝癌细胞HepG-2和人胃癌细胞SGC7901变化较少,而人脐静脉内皮细胞ECV304变化不明显。TUNEL实验中经计数得到肿瘤抑素7肽对鼠黑色素瘤细胞B16、人非小肺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG-2、人胃癌细胞SGC7901及人脐静脉内皮细胞ECV304的凋亡率分别为:68.45%、54.82%、30.31%、16.06%、10.19%。结论:综上所述肿瘤抑素7肽具有抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡的抗肿瘤活性,且对不同的肿瘤细胞活性不同,其对B16、A549作用较强,对HepG-2、SGC7901具有一定的抑制作用,而对ECV304作用不明显,肿瘤抑素7肽无明显的抗肿瘤血管生成作用,对机体正常细胞的作用较弱:本课题表明了肿瘤抑素7肽的抗肿瘤活性且具有抗肿瘤活性特异性,其具有毒副作用小等优点,为肿瘤的临床治疗提供了新的具有应用前景的药物。
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