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目的:通过无血清悬浮培养法从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中培养分离前列腺癌类干细胞并进行相关初步鉴定,为人前列腺癌干细胞(human prostate cancer stem cells, hPCSC)的进一步研究奠定基础。方法:1.分别采用含血清培养基(SSM)及无血清培养基(SFM)培养前列腺癌细胞系PC-3细胞;2.采用流式细胞仪分别检测SSM及SFM两种不同培养条件下前列腺癌类干细胞的比例;3.细胞免疫荧光鉴定前列腺癌类干细胞;4. MTT法测定比较前列腺癌类干细胞与普通前列腺癌PC-3细胞的增殖能力,并进一步计算比较两者的倍增时间;5.观察前列腺癌类干细胞在SSM中的诱导分化过程;6.前列腺癌类干细胞分化后行细胞双重免疫荧光鉴定。结果:1.少量前列腺癌PC-3细胞能在添加了表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)和人白血病抑制因子(LIF)的无血清培养基(SFM)中存活并形成呈悬浮状生长的前列腺癌细胞球团;2.无血清培养基(SFM)中前列腺癌类干细胞的比例为1.43%,而含血清培养基(SSM)中前列腺癌类干细胞的比例为0.41%,两者比较有统计学意义(P<0.05);3.前列腺癌类干细胞的增殖能力要强于普通前列腺癌PC-3细胞(9.6×105个vs 3×105个,P<0.05),且其倍增时间较普通前列腺癌PC-3细胞短(21.90 h vs 28.38 h,P<0.05);4.细胞免疫荧光实验显示前列腺癌类干细胞表达hPCSC表面抗原CD133,而普通前列腺癌PC-3细胞不表达hPCSC表面抗原CD133;5.前列腺癌类干细胞球可在含血清培养基(SSM)中贴壁分化,且完全贴壁分化后的前列腺癌细胞低表达hPCSC表面抗原CD44和CD133。结论:体外培养的前列腺癌细胞系PC-3细胞中含有少量表达hPCSC表面标志物、具有肿瘤干细胞特性的前列腺癌类干细胞,并且可通过无血清培养基(SFM)来富集这类类肿瘤干细胞。