动物源性食品中利巴韦林的检测方法研究

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利巴韦林,一种广谱抗病毒类药物,常用于治疗丙肝、出血热等病毒性疾病,由于监管不严,长期以来广泛应用于畜禽生产中。这类药物容易产生耐药性。长期大规模使用本品可导致畜禽中毒、免疫抑制、药物残留等问题,从而严重影响畜禽产品的质量。目前国内外利巴韦林的检测研究较少,现存的方法主要为固相萃取柱净化后使用仪器检测,包括液相色谱,液相色谱-质谱联用等,其他类型的吸附材料尚未得到充分研究,更多新颖的仪器检测方法如压电检测、电化学检测等也未见充足报道,因此,探究利巴韦林的新型检测技术十分有必要。针对色谱分析技术,建立了一种可特异性识别利巴韦林的MSPE-HPLC检测方法。首先,利用一步水热法合成了一种锆功能化的四氧化三铁吸附材料,此材料可与利巴韦林上的顺式二羟基发生特异性结合。在最优的萃取条件和液相检测条件下,对材料的吸附性能进行评价,发现材料对利巴韦林吸附迅速,可在5 min内达到吸附饱和;进一步利用准二级动力学模型对材料的吸附作用进行评价,结果显示磁性材料与利巴韦林之间确实存在有力的化学结合作用。在最优的实验条件下,建立的MSPE-HPLC方法对不同浓度的利巴韦林溶液(10-200μg/L)具有良好的线性关系(R2>0.99),检出限为2.68 μg/L(S/N=3)。此外,建立的方法具有良好的选择性、精密度及重复性。最后对方法的实际应用性进行评价,经过对三种空白样品(鸡肝、鸡蛋、虾)的加标实验,发现回收率范围为74.13%-92.90%。针对传感器检测技术,制备了一种可特异性识别利巴韦林的抑制性免疫传感器。首先,将对氨基苯甲酸电聚合到金电极表面以获得羧基修饰的金电极,经活化后,羧基修饰的金电极与带有氨基的利巴韦林抗原结合,得到可与利巴韦林抗体发生特异性结合的传感器。由于利巴韦林也可与利巴韦林抗体特异性结合,故而利巴韦林与传感器之间会形成竞争关系,当三者共存时,利巴韦林的含量变化会引起与传感器结合的利巴韦林抗体量的变化,从而导致传感器频率发生变化。在最优的羧基修饰条件下,选择合适量的抗原进行连接,对制备的传感器进行了电化学表征,显示传感器已成功制备。在最优量的抗体条件下,利巴韦林的检测线性范围为1-750μg/L,检出限(IC15)为2.64 μg/L,灵敏度(IC50)能够达到31.49 μg/L。将制备的传感器用于实际样品中利巴韦林的检测,回收率范围为88.01%到94.42%。
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